论文部分内容阅读
杜仲(Eucommia ulmoides Oliv.)为杜仲科杜仲属多年生落叶乔木,以干燥的树皮入药,用药历史悠久,始载于《神农本草经》,位列上品。味甘,性温,具有补肝肾,强筋骨,安胎之效,药用价值甚高。但是目前杜仲的质量控制方法尚不完善,仅以松脂醇二葡萄糖苷含量作为杜仲质量检测的唯一指标。同时作为常用中药及保健品,有文献报道杜仲具有潜在的遗传毒性,为了完善杜仲的安全性评价数据,本研究对杜仲的化学成分进行了定性定量分析,并对杜仲的安全性进行了初步探索。1基于LC-MS联用的杜仲主要化学成分定性及定量分析建立了超高效液相串联质谱(UPLC-MS/MS)对杜仲主要成分定性及定量的分析方法。定性采用UPLC-Q-Exactive轨道阱高分辨质谱技术,负离子检测模式,共鉴定98个色谱峰,包括木质素类38个,环烯醚萜类13个,黄酮类9个,苯丙素类15个,酚类7个,其余化合物共16个;定量采用UPLC-MS/MS法,负离子MRM检测模式,分析杜仲中松脂醇二葡萄糖苷、松脂醇单葡萄糖苷、丁香脂二葡萄糖苷、桃叶珊瑚苷、京尼平苷、京尼平苷酸、车叶草苷共7个主要成分的含量。在考察的浓度范围内测定的成分线性关系良好(R~2>0.9915),精密度RSD<3.42%,重复性RSD<4.32%,回收率(n=9)在 91.04%～108.15%,RSD 均小于 4.89%,结果表明,该方法灵敏度高、重现性好,分析快速、准确、可靠,可用于定性、定量检测杜仲中主要化学成分,为综合评价杜仲的质量提供参考。2杜仲提取物的急性毒性及90天重复给药毒性研究依照药物急性毒性研究技术指导原则,Wistar大鼠对杜仲提取物的最大耐受量大于168.0g/kgBW。依照药物重复给药毒性试验技术指导原则,给药13周,Wistar大鼠在11.2g生药/kgBW(相当于人体临床剂量84倍)剂量下出现肾脏病理改变,恢复5周后肾脏病理改变恢复正常。在56.0g生药/kgBW(相当于人体临床剂量420倍)剂量下,停药恢复5周,大鼠肾脏发生的病理改变仍有个别存在。3杜仲提取物的遗传毒性研究依照药物遗传毒性研究技术指导原则,细菌回复突变试验结果显示,在每皿加入杜仲生药量0.0325mg～22mg的剂量范围内对组氨酸缺陷型鼠伤寒沙门氏菌无明显致突变作用;小鼠骨髓细胞微核试验结果显示,昆明小鼠在给予杜仲生药5.5～22.0g/kg BW的剂量范围内未见有遗传毒性;体外哺乳动物细胞染色体畸变试验结果显示,在给予杜仲生药2～20mg/mL的剂量范围内未见明显的遗传毒性。杜仲遗传毒性结果显示是无致突变性的。