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目的:建立耐17-AAG的耐药株OE19,根据蛋白芯片观察耐药株与正常株细胞信号转导的差异,探索其可能的耐药机制,从可能的耐药机制中寻找合适的克服或逆转17-AAG及类似的Hsp90抑制剂耐药的策略。方法:（1）MTT比色法确定17-AAG对OE19的IC50值,将含17-AAG的培养基用于长期培养细胞株,用浓度梯度递增法逐渐增加药物浓度,当耐药株与敏感株IC50相差至少十倍时即获得耐药,培养时间不低于1个月;（2）Western Blot法观察敏感株和耐药株在两条生存通路-PI3K/AKT/mTOR和Ras/Raf/ERK中蛋白的表达情况;（3）免疫组化检测两种细胞在裸鼠异种移植瘤中P-AKT和P-ERK两种信号转导蛋白的表达差异;（4）利用Human RTK Phosphorylation Antibody Array观察耐药株与正常株细胞在受体酪氨酸激酶上表达的差异;（5）应用Western Blot和qRT-PCR进一步验证蛋白芯片中目标蛋白的表达和转录情况;（6）利用目标蛋白的选择性抑制剂验证其在耐药中作用;（7）应用Lipofectamine 3000脂质体转染试剂盒和带有目的基因的质粒,转染敏感株细胞,过表达目的蛋白,进一步验证FYN在耐药中发挥的作用。结果:（1）耐Hsp90抑制剂17-AAG的耐药株OE19建立成功,耐药株IC50是敏感株的28倍;（2）Western Blot显示在耐药株中P-AKT和P-ERK两种蛋白高表达;（3）免疫组化检测同样显示耐药细胞在裸鼠异种移植瘤中P-AKT和P-ERK两种蛋白表达上调;（4）蛋白芯片筛选出在两种细胞中表达具有差异的受体酪氨酸激酶,其中我们挑选了差异较为显著的FYN进行后续研究;（5）Western Blot和qRT-PCR进一步验证了在耐药株中FYN蛋白和mRNA表达量较敏感株高;（6）推测FYN蛋白的上调与AKT和ERK的磷酸化水平提高有关,因此我们选用了目标蛋白FYN的选择性抑制剂PP2作用于耐药株,结果显示PP2能显著减少耐药株P-AKT和P-ERK的表达,与17-AAG协同作用耐药株表现出明显的增殖抑制效应,一定程度上能恢复了OE19对17-AAG的敏感性;（7）通过脂质体转染过表达FYN基因,增加FYN蛋白的表达,能诱导敏感株细胞出现较为明显的耐药特性。结论:通过蛋白芯片,初步探索出了FYN蛋白引发OE19对Hsp90抑制剂17-AAG耐药的机制。在实验中,我们还发现耐药株不仅对17-AAG耐药,也对其他类似的Hsp90抑制剂产生一定程度的耐药,如STA-9090（Ganetespib）,提示肿瘤细胞对Hsp90抑制剂耐药的机制具有一定的共性。这为今后在基础研究乃至临床应用中减少17-AAG及类似的Hsp90抑制剂耐药情况的发生提供了新的策略。