吡柔比星诱导人膀胱癌T24细胞凋亡及其机制的实验研究

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目的:研究不同质量浓度吡柔比星(Pirarubicin,THP)对膀胱癌T24细胞增殖,细胞周期及凋亡的影响,并检测其对Survivin mRNA的表达变化,探讨THP对膀胱癌T24细胞凋亡的诱导作用及其机制,为THP在膀胱癌的灌注治疗中提供一定的实验理论依据。方法:1.使用不同质量浓度的THP(0、0.1、1、10μg/ml)作用膀胱癌细胞株T24,在倒置相差显微镜下观察细胞形态学的改变。2.使用不同质量浓度的THP(0、0.1、1、10μg/ml)处理膀胱癌细胞株T24,应用CCK-8法实验检测THP对人膀胱癌细胞株T24增殖的影响。3.应用流式细胞仪碘化丙啶(PI)单染法,检测不同浓度THP作用T24细胞株24小时后对其细胞周期的影响。4.Annexin-V/PI双染色法,检测THP处理膀胱癌T24细胞株24小时后,不同质量浓度(0、0.1、1、10μg/ml)THP对膀胱癌T24细胞凋亡的影响。5.应用RT-PCR方法检测在不同质量浓度(0、0.1、1、10μg/ml)THP处理T24细胞24小时后,Survivin mRNA在T24细胞中的表达变化。结果:1.在倒置相差显微镜下可观察到,空白对照组的T24细胞,呈多边形、贴壁生长,胞质饱满,相邻细胞相互融合,生长非常旺盛。经THP作用后,随着浓度的增加,细胞变圆,体积开始减小,细胞核固缩出现,核颜色加深,折光性增强,并且部分细胞出现了漂浮及坏死的现象,表现为浓度的依赖性。2.经CCK-8法检测24h,48h,72h四组细胞增殖水平,根据测定的OD值比较各组细胞生长情况,与对照组比较,各组浓度的THP在24h,48h,72h均可以抑制膀胱癌T24细胞的增殖,差异具有统计学意义(P<0.05),计算加入THP组24h,48h,72h增殖抑制率,我们发现其抑制作用呈现一定的时间及浓度依赖性(P<0.05)。3. PI单染法测细胞周期显示:不同浓度THP(0、0.1、1、10μg/ml)作用于膀胱癌T24细胞24h后,停滞于G2/M期细胞百分率分别为:(5.45±0.51)%、(7.91±1.33)%、(81.34±1.43)%、(88.97±2.95)%,各实验组G2/M期细胞百分率明显增加,与对照组比较表现为浓度依赖性(P<0.05)。4.Annexin V/PI双染色法检测显示THP能诱导膀胱癌T24细胞凋亡,(0、0.1、1、10μg/ml)THP作用于膀胱癌T24细胞24h后,凋亡率分别为:(6.18±0.27)%、(15.29±0.98)%、(19.56±1.45)%、(23.81±0.81)%,与对照组比较,各实验组凋亡率明显增加(P<0.05)。5.不同质量浓度(0、0.1、1、10μg/ml)THP处理T24细胞后,使Survivin mRNA的表达显著下调,表现为浓度依赖性(P<0.01)。结论:THP在体外可以抑制膀胱癌T24细胞增殖,并且表现为一定时间以及浓度的依赖性,即随着THP药物浓度的增加和作用时间的延长,对膀胱癌T24细胞的生长抑制作用越来越明显。THP能够诱导膀胱癌T24细胞的凋亡,将细胞阻滞于G2/M期,在一定范围内表现为浓度的依赖性。其机制可能和Survivin mRNA的表达下调有关。
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