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第一部分 ApoE-/-小鼠动脉粥样硬化模型lncRNAs芯片差异表达谱及生物信息学分析目的:为寻找可用于临床诊断的lncRNA,构建动脉粥样硬化模型寻找lncRNAs与mRNAs差异表达谱,分析差异表达的lncRNAs涉及的功能、通路,寻找感兴趣的lncRNA进一步研究。方法:ApoE基因敲除小鼠经高脂饲料喂养8周后,检测血脂水平,后对主动脉整体行油红O染色,构建动脉粥样硬化模型,将动脉粥样硬化血管与正常血管取材,行转录组测序分析,对差异lncRNA关联的mRNAs进行GO和Pathway分析。结果:1、治疗8周后,高脂饮食组小鼠的TC、HDL-C、LDL-C血脂水平显著高于正常饮食组小鼠(P<0.01);实验组小鼠油红O染色提示红色动脉粥样硬化斑块阳性比例高达68%,与对照组(15%)相比显著升高。2、与对照组血管相比,动脉粥样硬化血管共检测出4711个差异表达的lncRNA,其中上调2209个,下调2502个,另有2191个mRNA表达上调,1302个mRNA表达下调(Fold change ≥ 2.0)。3、GO分析显示差异表达的基因间lncRNAs相关的mRNAs主要涉及DNA甲基化、表观遗传正调控、核小体组装、三羧酸循环、蛋白质结合、Poly(A)尾等生物功能;基于KEGG数据库的Pathway分析显示涉及氧化磷酸化、心肌收缩、PPAR信号通路、过氧化物酶体、RIG-I样受体信号通路等方面。结论:芯片检测结果揭示了动脉粥样硬化模型独特的lncRNA表达谱,其差异的lncRNAs和mRNAs以上调居多,其中超保守序列uc.84高表达用于下一步研究;GO分析表明差异表达的lncRNA与代谢和炎症有关,Pathway分析与炎症信号通路,如PPAR信号通路、TNF信号通路、CAM和NOD样受体信号通路有关,这些炎症途径现被广泛研究并证明与动脉粥样硬化相关联。第二部分长链非编码RNA uc.84对血管平滑肌细胞作用目的:为了评估uc.84在VSMC增殖、迁移中的作用,我们进行了 siRNA介导的敲低实验。方法:通过qRT-PCR鉴定uc.84细胞表达特异性,PDGF-BB刺激后评估uc.84表达量,体外培养VSMC并分为4组,空白对照组;PDGF-BB组(浓度为20ng/mL);siRNA 干预组;siRNA+PDGF-BB 组(浓度为 20ng/mL);分别行 Western Blot 检测及划痕实验。结果:1、uc.84在血管平滑肌细胞内富集,PDGF-BB刺激后在一定范围内呈浓度及时间依赖性下调。2、与对照组相比,siRNA转染后增殖相关蛋白PCNA的表达上调,收缩表型蛋白α-SMA的表达下调(P<0.05),表明siRNA uc.84转染VSMC可模拟PDGF-BB作用,使平滑肌细胞从正常收缩状态向增殖状态的表型转换,且uc.84沉默并不会减弱PDGF-BB 作用。结论:lncRNA uc.84在维持血管正常收缩表型中发挥重要作用,可抑制血管平滑肌细胞增殖及迁移,在动脉粥样硬化形成过程中发挥保护作用。第三部分循环血uc.84早期诊断急性心肌梗死的价值目的:探讨uc.84是否可作为急性心肌梗死的独立诊断因子及早期诊断急性心肌梗死的准确性。方法:从42名急性心肌梗死患者及42名非急性心肌梗死对照组全血标本中检测uc.84的表达差异,使用ROC曲线来判断uc.84作为生物标志物对急性心肌梗死的诊断可靠性。结果:1、比较受试者基线临床特征,AMI和非AMI患者之间心脏生物标记物cTnT和CK-MB差异显著(P<0.001),白细胞计数之间差异有统计学意义;2、室温静置时间对uc.84的血浆水平几乎没有任何影响,且uc.84与白细胞计数之间无明显相关性。3、与非AMI患者相比,AMI患者全血中uc.84的表达显着增高,uc.84诊断AMI的ROC曲线下面积(AUC)为0.8588(95%置信区间),当其相对表达量处在最佳截断点时,其特异度为73.81%、灵敏度为83.33%。结论:uc.84在急性心肌梗死与非急性心肌梗死患者之间表达有显著差异,用于诊断AMI有较高的特异度和灵敏度,可为AMI诊断提供参考。