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松口蘑[Tricholoma matsutake （s.Ito et Imai ） Sing.]是世界上名贵的野生食用菌,提取物具有增强免疫、抗肿瘤活性。本论文在实验室前期工作的基础上,对松口蘑一种抗肿瘤糖蛋白的分离纯化和结构鉴定、体外抗肿瘤及抗瘤谱、联合化疗、抗肿瘤作用机理及急性毒性等进行了研究。采用DEAE-Sepharose F.F和AKTA快速分离制备系统对水浸提松口蘑发酵菌丝体的粗提物进行分离纯化,得到均一组分MTS03。冻干后样品为白色絮状物质,易溶于水,不溶于乙醇、乙醚等有机溶剂,样品中多糖和蛋白的含量分别为12.46%和86.53%,MALDI-TOF-MS测定分子量为22908.93。红外光谱、紫外光谱的分析结果表明,MTS03含有O-糖肽键,糖链部分以α-型糖苷键连接,氨基酸自动分析仪分析含有18种氨基酸,气相色谱分析单糖组成为阿拉伯糖:木糖:甘露糖:葡萄糖:半乳糖=1.46: 2.22: 7.74: 1.29:0.61,是一种微观非均一性糖蛋白,经肽谱分析鉴定结合MTS03的分子量和性质研究,初步认为MTS03可能是一种新的糖蛋白。采用MTT法检测MTS03对肿瘤细胞的抑制增殖作用和抗瘤谱,以及对正常细胞的毒性,研究了MTS03的热稳定性和不同批次发酵生产的菌丝提取的糖蛋白MTS03对肿瘤细胞的抑制作用。对S180、MCF-7、Bel-7402及正常肝细胞L-02的体外抑制活性研究,作用24 h的IC50分别为26.64、24.32、77.98、1366.49μg/mL,作用48 h的IC50为15.02、9.37、25.28、190.60μg/mL,作用72 h的IC50为8.18、7.55、11.39、97.21μg/mL。作用24 h对三种细胞的治疗指数TIS180、T I MCF-7、T I Bel-7402分别为51.29、56.19、17.52,随作用时间延长,对正常细胞也表现出一定的毒性,治疗指数也相对减小,高浓度和长作用时间对L-02的抑制作用较大。MTS03具有较广的抗瘤谱,对多种来源细胞均有一定的抑制作用,其中对MCF-7、HL-60和C6等肿瘤细胞的效果最好。MTS03具有一定的热不稳定性,在常温下稳定,但温度超过56℃后随时间延长MTS03逐渐失去活性。不同发酵批次的菌丝提取的MTS03对S180和MCF-7细胞具有基本相同的杀伤活性,表明MTS03在发酵、提取过程中具有良好的可重复性和稳定性,以及MTS03的制备工艺的可行性。考察了MTS03联合5-Fu体外对MCF-7和Bel-7402细胞的增殖抑制的影响及增效减毒作用,结果发现合用后对两种细胞的q值均大于0.85,在合适的浓度q值大于1.25,具有良好的增效作用。MTS03与5-Fu合用后,显著增加了肿瘤细胞对5-Fu的敏感性,单独使用5-Fu对MCF-7细胞的IC50为6.37μg/mL,而使用2.5、5μg/mL MTS03与不同浓度5-Fu合用时, IC50分别降低为0.45μg/mL和0.37μg/mL,为原来浓度的1/14.16和1/17.22,而降低两者浓度后合用对L-02细胞的毒性极小,从而达到了增效减毒的作用。