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目的观察滋阴补肾方对围绝经期综合征大鼠的促雌激素作用并探讨其上游调控因子及可能的分子机制。方法1.选取健康清洁级12月龄的Wistar大鼠,连续5天观察阴道脱落细胞,选取动情周期较长的18只,作为围绝经期模型大鼠。按完全随机数字表将其分为滋阴补肾方实验组,雌二醇对照组与空白对照组,口服用药4周后,观察不同组别大鼠阴道脱落细胞、外周血E2水平以及子宫形态学的差异,同时采用大鼠尾部皮肤温度测定,旷场实验和高空十字迷宫试验、新异物体识别测试观察不同组别大鼠的潮热症状、焦虑等情绪障碍以及记忆障碍的差异,最终评价滋阴补肾方对围绝经期大鼠症状的改善作用及促雌激素作用。2.将完全随机分组的围绝经期大鼠手术去除卵巢后分为滋阴补肾方低剂量组、中剂量组、高剂量组（均用药4周）,与雌二醇对照组（用药4周）及空白对照组比较,使用实时荧光定量核酸扩增检测系统（Real-time Quantitative PCRDetecting System;QPCR）、蛋白质印迹法（Western Blot;WB）、放射免疫法测定各组大鼠雌激素合成、转运、代谢途径中的关键酶（CYP17、CYP19、3βHSD、17βHSD）的活性、表达及雌激素、雌激素受体表达变化,探讨滋阴补肾方促雌激素作用的上游调控因子及分子机制。结果1.围绝经期大鼠症状行为学观察:空白对照组大鼠皮温较高且不稳定,焦虑状态明显,新事物识别能力差,符合围绝经期机体状态。与空白对照组比较,滋阴补肾方实验组大鼠皮温稍有降低但变化幅度不大,焦虑状态改善,新事物识别能力增强。低、中剂量组对比无明显差异,高剂量组改变明显,但改善积分无E2对照组明显。根据拍片结果观察,空白对照组大鼠的动情周期均有不同程度的紊乱（阴道脱落细胞角化指数<50%）及延长,其中以动情间期和动情后期为主。E2对照组大鼠动情周期明显缩短,尤以动情期多见;滋阴补肾方实验组大鼠动情周期延长,以动情前期和动情期多见。其形态变化表现为:动情前期椭圆形有核上皮细胞增加,体积大,核染深,少量白细胞以及角化上皮细胞。动情期片状角化上皮细胞较多,多重叠堆积,有核上皮细胞及白细胞较少。动情间期白细胞大量出现,有核上皮细胞及角化上皮细胞减少。动情后期白细胞、有核上皮细胞及角化上皮细胞均存在,但无明显的比例关系。根据拍片结果可见:空白对照组大鼠子宫内膜变薄萎缩,腺体量少,呈单管散在排列状态,腺腔大小不等,肌层变薄,肌纤维不规则排列,浆膜层欠光滑。E2对照组大鼠腺体上皮细胞增高更明显,腺体数量明显增多,肌纤维排列较规则,浆膜层较光滑,部分个体子宫内膜上皮出现乳头状增生。滋阴补肾方实验组大鼠子宫内膜可见腺体上皮增高,腺体数量增多,肌层排列稍规则,浆膜层较光滑。对于细胞活性的检测:与不含药血清组比较,不同浓度含药血清组的细胞活性及细胞抑制率均存在统计学差异（p<0.05）。与KGN组比较,MPP组、5%含药血清组、MPP+5%含药血清组的细胞活性及细胞抑制率均存在明显统计学差异（p<0.05）。2.滋阴补肾方促雌激素及雌激素受体作用:滋阴补肾方可上调血清中雌激素浓度,与空白对照组比较,低、中、高剂量组血清中E2浓度的百分结合率均存在明显统计学差异（p<0.05）,但较E2对照组浓度降低,存在明显统计学差异（p<0.05）。与空白血清组比较,2%,5%,10%浓度的含药血清E2浓度均有升高（均为p<0.05）,且不同浓度间相互比较,也存在明显统计学差异（p<0.05）。ERα的mRNA表达上,与空白对照组比较,DKTP低、中、高剂量组的mRNA表达量均有上调（p<0.01）;但DKTP低、中、高剂量组ERα的mRNA表达均低于与E2对照组（p<0.01）;ERα的蛋白表达上,与空白对照组比较,DKTP低、中、高剂量组均存在明显统计学差异（p<0.05）;与E2对照组比较,DKTP低、中、高剂量组均存在明显统计学差异（p<0.05）;DKTP低剂量组与中剂量组的蛋白表达无明显统计学差异（p>0.05）;不同浓度含药血清ERα的mRNA表达均存在明显统计学差异（p<0.05）。与空白血清组比较,5%、10%含药血清组ERα的蛋白表达均存在明显统计学差异（p<0.05）,2%含药血清组的蛋白表达与空白血清对照组无统计学差异（p>0.05）。3.促雌激素作用的分子机制探讨:与KGN组比较,MPP组、5%含药血清组、MPP+5%组卵巢颗粒细胞关键酶（CYP17、CYP19、3βHSD、17βHSD1）的mRNA表达均存在明显统计学差异（p<0.05）。与KGN组比较,17βHSD1的蛋白表达存在明显统计学差异（p<0.05）。与KGN组比较,不同组别卵巢颗粒细胞血清浓度的百分结合率均存在明显统计学差异（p<0.05）,且不同组别间的血清浓度结合率也存在统计学差异（p<0.05）。结论1.实验大鼠潮热、记忆力减退、焦虑、动情周期减少、组织病理学改变,提示围绝经期综合征大鼠模型制备成功。2.滋阴补肾方能有效改善围绝经期综合征机体潮热、记忆力减退、焦虑等症状行为,并促进卵巢、子宫组织病理改善。3.不同剂量的滋阴补肾方对于血清中雌激素及雌激素受体的mRNA表达及蛋白表达水平均有明显的上调作用,同时增强卵巢颗粒细胞活性,降低细胞抑制率。提示滋阴补肾方低、中、高剂量组具有明确的促雌激素及雌激素受体作用,且随着剂量的增加,其作用越强。4.滋阴补肾方对于卵巢颗粒细胞中17βHSD1的表达明显上调,提示17βHSD1可能是滋阴补肾方发挥促雌激素作用的关键调控分子。能够通过研究17βHSD相关的靶向药物治疗围绝经期综合征。