药物诱导肝损伤（DILI）是指因药物本身或其代谢产物导致的肝脏损伤,已成为药物撤市和药物研发失败的主要原因之一。DILI是一个复杂的过程,在这个过程中,伴随着各种相关的生物酶和活性物种（活性氧、活性氮、活性硫等）,含量的变化。其中,过氧亚硝酰阴离子（ONOO-）在DILI早期阶段显著增加。因此,实现细胞和活体内ONOO-浓度变化的精准检测,对DILI机理研究以及预防具有重要意义。然而,ONOO-具有活性高、寿命短等特点,常规方法难以实现细胞和活体内ONOO-的无损监测。而小分子荧光探针具有高灵敏度、非入侵性和可以实现实时监控等优点,已成为细胞和活体内生物活性分子检测的可靠手段。基于此,我们通过筛选和设计策略相结合,开发了可用于细胞内ONOO-比率荧光成像的探针,并将其用于DILI研究,具体工作如下:（1）常规ONOO-探针容易受其它活性氧（如H2O2）的干扰,导致选择性有限等问题。针对此问题,我们将筛选和设计策略相结合,发展了具有高选择性的ONOO-荧光探针,并详细研究了其“构-效”关系。我们首先通过在2-苯基吡喃盐的苯基4’-位引入具有不同“供-吸”电子能力的基团,合成了四种基于吡喃盐的荧光探针。光谱实验结果表明,取代基显著影响探针对ONOO-的选择性和灵敏度;随着探针上取代基供电子能力的降低,探针的选择性逐渐改善,而灵敏度降低。当取代基为供电子的氨基时,探针2-2能很好的避免H2O2的干扰,专一地与ONOO-响应,具有很好的选择性。（2）由于上一个工作筛选出的探针对ONOO-响应后荧光淬灭,不利于生物成像应用。因此,我们在探针结构中引入具有ESIPT效应的苯并噻唑基团,合成对ONOO-具有比率响应的探针AHC和AHMC。探针AHC与ONOO-响应后,其最大发射波长从626 nm蓝移到462 nm,具有很好的比率响应（检测限低至1.8n M）,并且不受H2O2等活性物种干扰等优点。细胞实验结果表明,探针AHMC可用于细胞内源性以及外源性ONOO-的比率成像。我们进一步将探针AHMC用于DILI细胞成像研究。结果表明,随着药物（如INH）浓度增加,肝细胞内荧光比率比值也呈现了增加的趋势,说明该探针能够很好地用于药物诱导的肝损伤成像研究。（3）在上一个工作中,由于探针AHC中引入了羟基,导致探针具有较强的溶剂化效应,在成像过程中容易受到环境的干扰,不利于精准成像应用。为此,我们利用香豆素代替2-苯基吡喃盐中的苯基,同时在吡喃盐上引入久洛尼定基团,合成了比率型双光子荧光探针RTFP。体外实验结果表明,探针RTFP具有灵敏度高（检测限低至4.1 n M）、选择性好等优点。我们利用该探针实现了游离脂肪酸（FFA）诱导的非酒精性脂肪肝（NAFLD）、APAP诱导肝损伤和混合型肝损伤过程中ONOO-的检测,发现细胞色素P450 2E1（CYP2E1）在NAFLD、DILI和混合型肝损伤过程中都显著上调。