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自然界中当细菌面临胁迫环境时,进入一种称为非可培养状态(VBNC:viable but non-culturable),这种状态导致我们在实验室中分离出来的菌株只占环境的0.01%-4%。复苏促进因子(Resuscitation-promoting factor,Rpf)是一种有促进细菌复苏作用的蛋白质,在很低的浓度可以促进非可培养状态的细菌复苏,对正常生长的细菌也具有促进生长的作用。编码复苏促进因子基因的片段广泛在放线菌中存在。在红树林中,有丰富的放线菌资源,并且具有酶活性、抗肿瘤活性、抗病毒活性以及对一些病原菌和线虫有拮抗作用等多种生物活性。为了发掘红树林中更多的放线菌资源,本文对放线菌的rpf基因进行了克隆、表达、及对表达蛋白进行活性检测。从红树林来源的根际土壤样品经过排重后,分离出42株放线菌,16S rRNA基因扩增及鉴定结果表明42株放线菌分别属于放线菌纲下的5个目6个科8个属。这五个目分别是微球菌亚目(Micrococcineae)、链霉菌亚目(Streptomycetales)、小单孢菌亚目(Micromonosporineae)、棒杆菌亚目(Corynebacterineae)、鞘脂单胞菌目(Sphingomonadales)。在本次研究中其中的链霉菌为优势的放线菌种群,占所有菌株数的52.38%,包含了2个属分别为Kitasatospora 1株和Streptomyces有22株。发现放线菌纲下潜在的3株的新种菌株,分别为GXN 032、GXN 112、GXN 114,其16S rRNA基因扩增及鉴分别与Streptomyces avermitilis、Streptomyces similanensis和Nocardia speluncae相似。使用淀粉酶、蛋白酶、纤维素酶作为底物进行酶活性的筛选,共筛选出16株具有酶活性,产淀粉酶的活性菌株占产酶活性菌株的50%,产酶活性的菌株50%来自于链霉菌属,31.25%来自于小单胞菌属。从放线菌中共筛选出13株具有rpf基因的菌株,其中的Rpf-E和RhRpf放线菌均只有1株;Srpf-1、Srpf-7各筛选出3株放线菌的rpf基因,Srpf-3引物扩增出13株放线菌的rpf基因,占所有菌株的30.95%,占扩增rpf基因来的菌株的100%,其中有五株菌株能扩增出两种以上的rpf基因;能扩增出放线菌rpf基因的菌株主要为链霉菌属占筛选出来菌株的76.92%。对筛选出来的基因,通过在线软件预测其蛋白的生物信息,结果表明放线菌rpf蛋白是由20种氨基酸组成的一种稳定性的亲水性的蛋白。具有信号肽的解离位点,均有一个溶菌酶样结构域的可溶性溶转糖基酶样的结构域和LysM的结构域,同源性分析表明Rpf-3-GXN002在在同源性上与结核分枝杆菌的Rpf蛋白更为接近。对扩增出来的放线菌进行了克隆载体和表达载体的构建,将表达载体转化至宿主细胞中进行表达,分离纯化出一个约32KDa的蛋白。通过流式细胞仪的检测,证明表达的蛋白具有复苏处于VBNC状态的藤黄微球菌活性。