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目的：探讨小鼠脑缺血耐受预处理不同时间剂量以及诱导脑缺血耐受产生的不同时间窗,确立最佳耐受时间剂量和诱导时间窗;观察毛冬青总黄酮等中药成分对小鼠脑缺血耐受的影响,筛选具有增强脑缺血耐受作用的中药成分;探讨毛冬青总黄酮提高骨髓干细胞动员对大鼠脑缺血再灌注损伤的保护作用。 方法：1、采用两次结扎小鼠双侧颈总动脉方法造脑缺血耐受模型,通过观察不同预处理时间剂量下小鼠脑组织形态的变化,确定小鼠脑缺血耐受最佳时间剂量。 2、采用两次结扎小鼠双侧颈总动脉方法造脑缺血耐受模型,通过观察不同预处理诱导时间窗下小鼠脑组织形态的变化,确立小鼠脑缺血耐受最佳诱导时间窗。 3、采用两次结扎小鼠双侧颈总动脉方法造脑缺血耐受模型,通过观察毛冬青总黄酮等中药成分在最佳耐受时间剂量、诱导时间窗下对小鼠脑组织形态的变化,筛选出具有增强脑缺血耐受作用的中药成分。 4、采用稍加改良线栓法制作大鼠脑缺血再灌注模型,应用粒细胞集落刺激因子(G-GSF)刺激自体骨髓干细胞分裂增殖,并用5-溴脱氧尿核苷(Brdu)标记。观察大鼠脑组织HE染色、尼氏染色,免疫组化检测CD34和Brdu阳性细胞,免疫组化法检测Bcl-2、Bax蛋白表达。 结果：1、对小鼠脑缺血耐受不同时间剂量的影响预缺血10min+再次缺血30min组时间剂量较其他实验组能显著提高脑缺血时脑神经细胞的耐受作用(P<0.01)。 2、对诱导小鼠脑缺血耐受产生的不同时间窗的影响120h组的诱导时间窗较其他实验组能显著提高脑缺血时脑神经细胞的耐受作用(P<0.01)。 3、不同中药成分对小鼠脑缺血耐受的影响与模型组相比,养血清脑颗粒组、毛冬青总黄酮小剂量组、柿叶黄酮大、中剂量组、生姜挥发油大、中剂量组、川芎嗪注射液大剂量组、灯盏花素注射液大剂量组能显著增强脑缺血耐受(P<0.01)。 4、动员自体骨髓干细胞对大鼠脑缺血再灌注损伤的影响与模型组(非动员组)相比,毛冬青总黄酮大、中剂量组、动员组对脑缺血时脑组织神经细胞的损伤的保护作用显著(P<0.01),毛冬青总黄酮小剂量对脑缺血时脑神经细胞的损伤的保护作用显著或明显(P<0.01或P<0.05);毛冬青总黄酮大剂量组Bax蛋白表达有显著的统计意义(P<0.01),动员组Bax蛋白表达有明显的统计意义(P<0.05);动员组、毛冬青总黄酮大剂量组Bcl-2蛋白表达明显增强(P<0.05);毛冬青总黄酮大剂量组CD34阳性细胞表达明显增强(P<0.05);毛冬青总黄酮大、中、小剂量组Brdu阳性细胞表达显著增强(P<0.01),动员组Brdu阳性细胞表达明显增强(P<0.05)。 结论：通过对不同时间剂量、不同诱导时间窗下小鼠脑缺血耐受的研究,以10min脑缺血作为预处理,可对间隔5天后30min脑缺血引起的脑神经细胞损伤产生一定的保护作用,因此预缺血10min+再次缺血30min、120h诱导时间窗为比较合适的脑缺血耐受时间;柿叶黄酮、生姜挥发油、毛冬青总黄酮以及川芎嗪注射液均具有不同程度的增强脑保护作用,促进脑缺血耐受形成;毛冬青总黄酮具有很强的对脑缺血脑神经细胞的保护作用,与骨髓动员剂可能具有协同作用;自体骨髓干细胞经G-CSF动员后可向大鼠脑缺血区趋化并可分化为神经元前体细胞,显著促进脑缺血区血管再生,降低细胞凋亡率。