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背景目前应用于乳腺癌检测的肿瘤标志物只有有限的几个,不但敏感性和特异性都不高,而且对乳腺癌早期检测都没有很好的效果。应用自身抗体技术筛选得到的乳腺肿瘤相关蛋白不仅有助于提高乳腺癌检测的敏感性和特异性,还能在很大程度上填补乳腺癌早期检测的空白。方法运用生物淘洗富集技术,用正常人和乳腺癌病人血清从一个乳腺癌cDNA T7噬菌体文库中筛选肿瘤相关蛋白。经生物淘洗,用噬菌斑转印分析和免疫化学检测方法得到肿瘤相关蛋白。再用PCR和测序的方法分析这些潜在的肿瘤相关噬菌体克隆,寻找在开放阅读框架内的序列,通过BLAST比对识别出这些噬菌体表达蛋白。后用酶联免疫吸附(ELISA)的方法对87个乳腺癌病人和87个正常人血清样品,检测每一个开放阅读框架内的噬菌体表达蛋白的自身抗体。为评估单个标志物和多标志物联合诊断的准确率,使用了逻辑回归模型和留一交叉验证方法。最后又从实验室保存的经四轮生物淘洗后的肺癌cDNA T7噬菌体文库中用同样的方法筛选、鉴定和分析乳腺癌相关蛋白。结果淘洗富集后我们得到了100个乳腺肿瘤相关噬菌体克隆,序列分析表明其中6个不同的噬菌体表达蛋白在阅读框架之内。BLAST比对结果与ASB-9, SERAC-1和]RELT这3个蛋白最为匹配。应用自身抗体,对这6个噬菌体表达蛋白的ELISA分析结果显示,其中3个克隆在统计学上能显著区分出病人和正常人。用87份乳腺癌病人血清和87份正常人血清对这3个噬菌体表达蛋白进行验证,逻辑回归模型联合检测的敏感性达到80%,特异性达到100%；留一交叉验证3者联合的预测值敏感性和特异性分别达到76.5%和82.4%。后从肺癌文库中筛选得到了43个乳腺肿瘤相关噬菌体克隆,经PCR挑出电泳条带明显不一样的10个产物去测序。测序结果通过NCBI核酸数据库比对得到2条开放阅读框架内蛋白序列信息。应用自身抗体,对表达HSPA4L和RINT-1这两个蛋白噬菌体的ELISA分析结果显示,这2个克隆在统计学上能显著区分出病人和正常人。随机选取87份乳腺癌病人血清和87份正常人血清对这两个噬菌体表达蛋白进行验证,逻辑回归模型联合检测的敏感性达到94%,特异性达到100%；留一交叉验证两者联合的预测值敏感性和特异性分别达到84.5%和95%。ROC曲线分析和留一法都表明多个标志物联合检测的价值要高于单标志物,意示着多标志物联合在诊断中的重要性。结论对乳腺癌来说,血清自身抗体是其早期检测和诊断的一种有效方法,而且多抗体联合应用可实现更高的诊断准确率。下一步就是如何更进一步的提高诊断准确率,以使其应用到大规模的健康普查中。