论文部分内容阅读
为开发制备一种新型的兔肠源抗菌蛋白,本试验将兔小肠组织匀浆,经高温处理,乙酸浸提后,然后对蛋白组分进行分离纯化,得到一种纯的兔肠源抗菌蛋白,通过对兔肠源抗菌蛋白的抗菌活性和抗病毒活性的初步研究,以及与常规抗生素的比较研究,初步确定了兔肠源抗菌蛋白在细菌性疫病防治方面、以及抗菌药物和抗病毒药物方面的应用前景。本课题主要研究内容包括以下几个方面:1.一种兔肠源抗菌蛋白分离纯化及抑菌活性的研究为探讨兔肠道组织抗菌有效成分的组成及其性质,本试验将新鲜兔小肠组织匀浆,经高温处理,乙酸浸提后,检测抗菌活性,再经SephadexG100和SephadexG75凝胶柱过滤层析,收集具有抗菌活性的蛋白组分,经SDS-PAGE电泳,考马斯亮蓝染色后,为一条蛋白带,其相对分子质量约为43×103。用琼脂糖弥散法和活菌计数试验检测纯化物对9株细菌(大肠杆菌8099株、ATCC35218株及地方分离株JN101,金黄色葡萄球菌ATCC6538株、ATCC25923株及地方分离株JN102,绿脓杆菌ATCC9027株,白色念珠菌ATCC10231株,白色葡萄球菌8032株)的抑菌作用。纯化的兔肠源抗菌蛋白对9株细菌的均有明显的抑菌作用,杀菌率介于78%与98%之间,显示了较强的抗菌活性。初步显示了兔肠源抗菌蛋白在细菌性疫病的防治方面的应用前景。2.兔肠道组织提取物与抗生素抗菌活性的比较研究为了对兔肠道组织抗菌有效成分进行定量研究,将新鲜兔小肠组织匀浆机匀浆,经高温处理,乙酸浸提后,检测抗菌活性,收集具有抗菌活性的兔肠道组织提取物,采用琼脂糖弥散试验,使用兔肠道组织提取物和常见抗生素(青霉素、红霉素、环丙沙星、庆大霉素、丁胺卡那霉素、磺胺甲噁唑)分别对大肠杆菌8099株、金黄色葡萄球菌ATCC6538株、绿脓杆菌ATCC9027株、白色葡萄球菌8032株作抑菌对比试验。实验结果表明:试验结果表明,兔肠道组织提取物的抗菌活性分别等效于不同浓度,不同种类的抗生素,使用兔肠道组织提取物替代抗生素治疗某些细菌性疾病是可能的,初步显示了它在抗菌药物方面的应用前景。3.兔肠源抗菌蛋白对病毒作用的初步研究为研究兔肠源抗菌蛋白的抗病毒活性,将新鲜兔小肠组织匀浆,经高温处理,乙酸浸提后,检测其抗菌活性,再经SephadexG100和SephadexG75凝胶柱过滤层析,收集具有抗菌活性的蛋白组分,将鸡新城疫病毒强毒株病毒液用灭菌生理盐水稀释至200倍LD50(鸡胚LD50)浓度,然后用适宜浓度的抗菌蛋白处理病毒液,鸡胚接种,鸡胚孵化至第80h,收集尿囊液,用血凝试验检测鸡胚尿囊液中的新城疫病毒血凝效价,鸡胚固定、组织切片观察,兔肠源抗菌蛋白处理后的NDV接种鸡胚后,鸡胚发育基本正常,无明显病变。而未经处理的NDV接种鸡胚后,病变比较严重,鸡胚发育不良。实验结果表明:使用兔肠道组织提取物替代某些抗病毒药物治疗某些病毒性疾病是可能的,初步显示了它在抗病毒药物方面的应用前景。综上所述,本研究首次由兔肠道组织中分离纯化了兔肠源抗菌蛋白,并证明兔肠源抗菌蛋白具有抗菌、抗病毒作用。首次揭示了兔肠源抗菌蛋白具有提高全身特异性免疫抗体水平及肠道粘膜免疫功能的作用。肠道粘膜免疫系统是机体防止感染的第一道防线,揭示了肠道粘膜免疫在机体全身免疫反应和肠道局部粘膜免疫反应中的功能作用的物质基础——兔肠源抗菌蛋白的生物学活性。展示了兔肠源抗菌蛋白作为抗菌、抗病毒药物的可能性和应用前景。