【摘 要】
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β-1,4-内切木聚糖酶(EC 3.2.1.8,简称木聚糖酶)可在木聚糖内部随机切割由β-1,4-糖苷键连接的主链,产生低聚木糖的混合物;β-木糖苷酶(EC 3.2.1.37)则通过从低聚木糖的非还原端去除末端单糖来释放木糖。两者能够协同水解木质纤维素生物质中的木聚糖来制备木糖,在食品、饲料、医药、造纸、生物燃料等多个领域有广泛应用。目前关于木聚糖酶和β-木糖苷酶的研究多集中在真菌来源,但真菌来源
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β-1,4-内切木聚糖酶(EC 3.2.1.8,简称木聚糖酶)可在木聚糖内部随机切割由β-1,4-糖苷键连接的主链,产生低聚木糖的混合物;β-木糖苷酶(EC 3.2.1.37)则通过从低聚木糖的非还原端去除末端单糖来释放木糖。两者能够协同水解木质纤维素生物质中的木聚糖来制备木糖,在食品、饲料、医药、造纸、生物燃料等多个领域有广泛应用。目前关于木聚糖酶和β-木糖苷酶的研究多集中在真菌来源,但真菌来源的两种酶在碱性、高盐条件下活性低且不稳定,限制了其在工业中的应用。相比之下,大多数细菌来源的两种酶具有耐碱和耐盐等优点,因此,对细菌木聚糖酶和β-木糖苷酶的发现和研究具有重要意义。本论文分别将沙福芽孢杆菌(Bacillus safensis TCCC 111022)来源的木聚糖酶基因(xyn)和克劳氏芽孢杆菌(B.clausii TCCC 11004)来源的β-木糖苷酶基因(xyl)进行异源表达,得到重组木聚糖酶(rXYN)和重组β-木糖苷酶(rXYL)。对rXYN的酶学性质进行研究发现:rXYN酶活为491.3 U/mg,最适温度为60℃,在50℃及以下稳定,最适p H为8.0,在p H 6.0-11.0范围内稳定;rXYN在高浓度Na Cl中仍有较高酶活,在2 mol/L Na Cl中的稳定性良好。对rXYL的酶学性质进行研究发现:rXYL酶活为7.9 U/mg,最适温度为60℃,在50℃及以下稳定,最适p H为8.0,在p H 7.0-10.0范围内稳定;rXYL在Na Cl中稳定,在200 mmol/L木糖中的耐受性良好。利用rXYN、rXYL水解山毛榉木聚糖、桦木木聚糖、小麦阿拉伯木聚糖,结果表明:rXYN、rXYL单独水解时的木糖产量极低,协同使用则可以显著提高木糖产量,三种底物的协同度分别为rXYN、rXYL单独水解时的3.57、5.21、2.67倍。利用rXYN和rXYL协同降解小麦秸秆、水稻秸秆、玉米秸秆、玉米芯和甘蔗渣碱提木聚糖进行木糖的制备,结果表明:通过优化加酶量和反应时间,五种碱提木聚糖的最高木糖产率分别为56.57%、52.76%、47.23%、38.77%和50.12%。
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