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目的:膀胱癌（Bladder caner,BC）居全球发病率第十、也是泌尿生殖系第二常见的恶性肿瘤,其中肌层浸润性膀胱癌（Muscle-invasive bladder cancer,MIBC）侵袭性强,预后差。化疗仍然是MIBC最主要且疗效确切的治疗方法之一。自1980s年代后期以来,含顺铂（Cisplatin,Cis）的联合化疗方案一直是标准治疗方案,然而,约高达50%的患者被筛查为不适合接受含顺铂化疗,尤其是那些肾功能不全和功能评分较差的患者,且Cis在应用过程中产生的广泛耐药问题形势严峻。奥沙利铂（Oxaliplatin,Oxa）作为第三代铂类药物,已有多项Ⅱ期临床试验展现出对BC的确切疗效,有潜力作为Cis的替代品,同时,诸多研究显示Oxa在抗肿瘤过程中都不可避免的产生了耐药性。p38 MAPK通路是Oxa诱导肿瘤细胞凋亡关键通路之一,其能够通过促进p38 MAPK的磷酸化来激活肿瘤细胞p38 MAPK通路,诱导细胞凋亡。上游转录因子1（Upstream transcription factor 1,USF1）属于p38 MAPK通路下游的转录因子之一,已被证实与肿瘤耐药性相关,但该基因在Oxa治疗膀胱癌中的耐药机制尚不清楚。在本研究中,我们通过构建膀胱癌Oxa耐药细胞系,初步探讨USF1、p38 MAPK通路在膀胱癌Oxa耐药机制中的作用。方法:以膀胱癌细胞株（T24、253J）作为实验敏感株,采用浓度梯度递增法逐步诱导膀胱癌Oxa耐药细胞株（T24-Oxa、253J-Oxa）。构建成功后CCK8法检测耐药细胞株的半抑制浓度IC50值,采用荧光免疫法（Immunofluorescence technique）、蛋白免疫印迹技术（Western blot,WB）检测敏感株和耐药株中p38 MAPK和磷酸化的p38 MAPK（p-p38 MAPK）表达量。使用Annexin V/PI双染试剂盒检测T24-Oxa和253J-Oxa在Oxa作用下的凋亡情况。应用荧光免疫和WB验证USF1在敏感株和耐药株中的表达差异。构建能特异性抑制USF1表达的慢病毒Lv-sh USF1和对照慢病毒Lv-sh Control后,感染Oxa耐药细胞株T24-Oxa和253J-Oxa得到下调USF1表达的细胞系T24-Oxa-sh USF1和253J-Oxa-sh USF1以及对照细胞系T24-Oxa-sh Control和253J-Oxa-sh Control,采用CCK8试剂盒测定Oxa对上述细胞系的IC50值,比较USF1下调后耐药细胞株对Oxa敏感性的变化。将过表达USF1的腺病毒Ad-USF1和对照病毒Ad-EGFP感染低表达USF1的Oxa敏感细胞株T24和253J,采用CCK8测定Oxa对上述细胞系的IC50值,比较USF1过表达后对Oxa敏感的细胞株对Oxa耐药性是否提高。结果:成功建立Oxa耐药的膀胱癌细胞株T24-Oxa和253J-Oxa,CCK8法测定Oxa对敏感株和耐药株的IC50值如下（单位:μM）,T24（0.802±0.175）,T24-Oxa（9.763±1.457）,253J（0.739±0.043）和253J-Oxa（12.47±2.480）。定量PCR的检测耐药相关基因（MDR1,MRP1和GSTP1）和抗凋亡相关基因（Bcl2,Bcl-W,XIAP和survivin）m RNA的表达量在耐药细胞株T24-Oxa和253J-Oxa中明显上升。在Oxa处理T24和耐药细胞株T24-Oxa以及253J和耐药细胞株253J-Oxa后,免疫荧光和WB检测到磷酸化的p38 MAPK（p-p38 MAPK）表达量明显上升,但是在耐药细胞株T24-Oxa和253J-Oxa中,凋亡标记分子PARP未发生切割。Annexin V/PI双染试剂盒检测T24-Oxa和253J-Oxa在Oxa作用下,凋亡期细胞几乎检测不到;WB和免疫荧光进一步确认了USF1在耐药细胞株中表达量明显上调。慢病毒Lv-sh USF1和对照慢病毒Lv-sh Control感染后的T24-Oxa和253J-Oxa细胞系的IC50分别是（9.114±0.873）,（14.562±1.176）,（2.894±0.361）和（6.046±0.522）μM。腺病毒Ad-USF1和对照病毒Ad-EGFP感染后的T24和253J细胞系的IC50分别是（3.872±0.552）,（0.804±0.111）,（1.675±0.154）和（0.743±0.108）μM。结论:Oxa处理T24和耐药细胞株T24-Oxa以及253J和耐药细胞株253J-Oxa后,p38 MAPK通路处于激活状态,但耐药细胞株的p38 MAPK通路虽然激活但未发生凋亡。USF1在Oxa耐药株中明显升高,沉默USF1的表达可以有效的提高T24-Oxa和253J-Oxa细胞对Oxa的敏感性,提高USF1的表达可以有效的降低T24和253J细胞对Oxa的敏感性。USF1的异常增高表现通过p38 MAPK通路,与膀胱癌细胞Oxa耐药性的产生有密切关联。