【摘 要】
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研究目的:5-氨基酮戊二酸光动力治疗（5-aminolevulinic acid mediated photodynamic therapy,ALA-PDT）常用于治疗重度寻常型痤疮（简称重度痤疮）,目前还没有最佳治疗参数,其对皮肤微生态的影响仍不确定。探索低强度红光ALA-PDT联合微创清除术治疗重度痤疮的有效性及安全性,采用宏基因组测序方法比较ALA-PDT治疗前后毛囊皮脂腺单位内微生物组结构
【基金项目】
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江苏省基础研究计划（江苏省自然基金）青年项目,《基于宏基因组学技术探讨ALA光动力疗法对寻常型痤疮毛囊和皮肤微生物菌群的影响》,项目编号SBK2017041380；
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研究目的:5-氨基酮戊二酸光动力治疗（5-aminolevulinic acid mediated photodynamic therapy,ALA-PDT）常用于治疗重度寻常型痤疮（简称重度痤疮）,目前还没有最佳治疗参数,其对皮肤微生态的影响仍不确定。探索低强度红光ALA-PDT联合微创清除术治疗重度痤疮的有效性及安全性,采用宏基因组测序方法比较ALA-PDT治疗前后毛囊皮脂腺单位内微生物组结构、多样性及功能基因特征的变化,深入了解重度痤疮毛囊皮脂腺内微生态特征及ALA-PDT如何调控毛囊内微生物群落结构及功能发挥作用,为优化治疗方案,提出重度痤疮发病新机制和ALA-PDT作用新机制提供依据。研究方法:对1 1名重度面部痤疮的患者进行纵向队列研究。采用5%ALA—PDT联合微创清除术清除皮损内容物,ALA短时间封包（90分钟）,低强度红光照射（功率密度50mw/cm2照射,总能量60J/cm2）,间隔2周共3次治疗。记录每次治疗前及开始治疗后12周时皮损计数及治疗全程发生的副反应,测定基线及治疗后12周TEWL及皮脂值。在基线和第2次治疗前采集额部面颊部皮损处毛囊皮脂腺单位内容物,用磁珠法提取DNA,利用Illumina平台进行宏基因组测序,对治疗前后微生物群落结构、多样性、功能基因特征等进行分析及比较。结果:1、疗效及安全性分析:开始治疗后12周时疗效最佳,有效率81.8%,副反应为一过性,VAS疼痛评分3-4分。治疗后12周7个（7/11）患者TEWL有下降趋势,但无统计学差异;所有患者皮脂分泌量下降,有统计学差异。2、宏基因组测序结果:毛囊皮脂腺内微生物组存在多样性,在门水平上优势物种为放线菌、变形菌、厚壁菌、拟杆菌;放线菌、变形菌共占94%。在属水平上优势物种为丙酸杆菌属、假单胞菌属和葡萄球菌属;丙酸杆菌属占主导地位。在种水平上优势物种依次为痤疮丙酸杆菌,表皮葡萄球菌和荧光假单胞杆菌。物种相关性分析提示丙酸杆菌属与假单胞菌属等呈负相关。3、功能基因特征分析:毛囊皮脂腺单位内功能基因存在多样性,贡献度最高的为丙酸杆菌属（98%）,其次为葡萄球菌属。与新陈代谢及遗传信息相关功能基因占主导地位,有氧代谢关联的TCA循环等相关功能基因占较大比例,各样本中均存在唾液酸酶、脂酶、卟啉代谢、ABC转运蛋白相关的功能基因。4、ALA-PDT治疗前后微生态的变化:1次ALA-PDT治疗后毛囊皮脂腺内微生物Alpha多样性显著增加,痤疮丙酸杆菌相对丰度显著下降,荧光假单胞杆菌相对丰度显著上升,超过100个参与有氧及无氧代谢和DNA复制的功能基因相对丰度降低,尤其是唾液酸酶、脂酶、琥珀酸脱氢酶等功能相关基因丰度显著下降。结论:1、微创清除术促进毛囊皮脂腺内ALA蓄积,低强度红光照射时疼痛轻微,该治疗方法总体疗效及安全性较好。2、重度痤疮毛囊皮脂腺内微生物群落及功能基因组成存在显著多样性,痤疮丙酸杆菌在数量及功能上占主导地位,可能与重度痤疮发病有关;革兰氏阴性菌丰度增高可能与痤疮严重程度有关;首次发现荧光假单胞杆菌在毛囊皮脂腺单位内的定植值得关注。3、ALA-PDT可能通过杀灭毛囊内痤疮丙酸杆菌,增加荧光假单胞杆菌和微生物群落多样性,抑制痤疮丙酸杆菌功能及毒力因子,重建毛囊内微生态平衡达到治疗作用。
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