南方红豆杉叶三种黄酮糖苷的分离和结构鉴定

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红豆杉属植物主要用于提取紫杉醇,剩余物中含大量黄酮类物质目前未得到开发利用。本文针对这一问题,以南方红豆杉(Taxus. chinensis var mairei)叶为原料,以提取紫杉烷类物质剩余物为实验对象,在摸索建立了分光光度法定量分析紫杉黄酮与UPLC法分析黄酮单体组分的基础上,采用正交试验设计优化了超声提取紫杉黄酮工艺参数,应用多种介质层析技术组合分离出了三种紫杉黄酮单体,借助1HNMR、13CNMR、HMBC、ESI光谱解析手段对分离组分进行了结构鉴定,主要结论如下:1、硝酸铝络合分光光度法定量分析紫杉黄酮,精密度、稳定性、重现性、加样回收率试验RSD值分别为0.352%、0.137%、1.33%、1.35%。2、超声提取参数对紫杉黄酮收率影响顺序为:料液比(极差值R=35.03)、超声次数(R=28.16)、超声时间(R=19.67)、乙醇浓度(R=16.30)、超声温度(R=16.27)。最佳提取工艺为:料液比1:20,乙醇浓度70%,超声次数3次,超声温度45℃,超声时间30mmin,紫杉黄酮收率47.99mg/g。3、比较AB-8大孔树脂与聚酰胺树脂对紫杉黄酮初步分离工艺,应用AB-8大孔树脂初步分离紫杉黄酮,回收率可达98.47±1.01%。40%乙醇水溶液组分富集了3种目标产物,该组分紫杉黄酮回收率为81.84±1.62%。硅胶柱分离40%乙醇水溶液组分,5BV,乙酸乙酯:甲醇,15:1,9:1,0:1梯度洗脱,其中乙酸乙酯:甲醇9:1组分得到黄酮单体3(25.1mg),甲醇组分主要包括黄酮糖苷1和2。减压ODS柱分离甲醇组分,3BV,10%、40%、50%、70%甲醇水溶液梯度洗脱,小试管分段收集(每个试管5mL),得到96个组分,UPLC检测合并,得到黄酮单体1(36.2mg)、2(15.7mg)和3(3.2mg)。4、鉴定3个黄酮单体结构为:槲皮素3-O-芸香糖(1)、山奈酚3-O-α-L-阿拉伯糖(1”’→6”)-β-D-葡萄糖苷(2)、山奈酚3-0-β-D-鼠李糖(1”’→6”)-β-D-葡萄糖苷(3),其中化合物(2)和(3)第一次从南方红豆杉叶中分离。本文研究的紫杉黄酮分析、提取、分离方法科学可行,能够直接应用于生产实践。本文研究工作能够为中药v类新药紫杉黄酮的开发提供技术支持和保证。
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