【摘 要】
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目的:研究不同条件对白念珠菌和光滑念珠菌形成单一生物被膜、混合生物被膜的影响,及数量与毒力之间的关系。方法:在这次实验中使用八株白念珠菌(Candida albicans,C.albican
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目的:研究不同条件对白念珠菌和光滑念珠菌形成单一生物被膜、混合生物被膜的影响,及数量与毒力之间的关系。方法:在这次实验中使用八株白念珠菌(Candida albicans,C.albicans)和两株光滑念珠菌(Candida glabrata,C.glabrata)来研究培养基(RPMI-1640,YPD,YND),培养的时间(24、48、72和96小时),初始接种量(光滑念珠菌:白念珠菌=1:1,光滑念珠菌:白念株菌=2:1和光滑念珠菌:白念珠菌=1:2)和流动模型对两念珠菌单/混合生物被膜的活细胞计数和相对丰度的影响。两株C.glabrata和八株C.albicans用来测试24和48小时形成SB/MB(Single biofilm,Mixed biofilm)的细胞数量,并进行了MB对卡泊芬净的敏感性实验,天冬氨酸蛋白酶(Secreted aspartic proteinase,SAP)和磷脂酶(Phospholipase,PL)的水平、外排泵功能和β-葡聚糖暴露的检测。XTT分析法和斑点实验检测念珠菌对抗菌药卡泊芬净耐药性,结晶紫染色观察生物被膜总量,ELISA试剂盒检测天冬氨酸蛋白酶和磷脂酶的含量。用倒置荧光显微镜IX71(Olympus,Tokyo,Japan)观察荧光图像,并用BD Accuri TM C6流式细胞仪(中国上海)在488 nm激发波长和525 nm发射波长下测量荧光强度。q RT-PCR检测外排相关基因表达。结果:在大多数情况下,动态状态下C.glabrata和C.albicans SB和MB的CFU均高与其他条件。除YPD培养基外,YPD培养基外,与SB相比MB中C.albicans比C.glabrata占优势的比例高。较高的初始接种量促进了SB和MB中相应的念珠菌数及其MB丰度。通过这项研究,在培养24小时和48小时后观察到念珠菌MB中了单个菌株细胞数与其SB相比下降。然而,与SB,MB中对卡泊芬净的抗真菌抗性,SAP和PL水平,罗丹明6G外排以及外排相关基因的表达显著增加(*p<0.05;**p<0.01;***p<0.001),同时β-葡聚糖的暴露减少。结论:我们发现,在大多数情况下,这些条件对C.albicans和C.glabrata的SB和MB种群有不同的影响,而C.albicans在MB中比C.glabrata占优势。我们也证明了C.albicans和C.glabrata可以形成具有竞争性的MB,并且MB的毒力并没有因为MB中单个菌株细胞数量的急剧下降而减弱(至少在培养48小时内)。
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