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为了制备用于临床心脑血管疾病监测的高特异性、高敏感性的抗肌红蛋白单克隆抗体,本研究利用两步法合成人肌红蛋白(myoglobin,Myo)全基因的基础上,构建原核表达载体并通过BL21(DE3)表达其融合蛋白；将获得的融合蛋白进行His标签特异性亲和纯化。与此同时,利用血清提纯的人肌红蛋白抗原筛选出高亲和力的单克隆抗体,最终利用所表达的融合蛋白筛选最具特异性并且能够进行夹心配对的一组单克隆抗体。本研究结果和结论如下：1.Myo全基因合成：在NCBI查询得到Myo氨基酸序列,并将Myo密码子经过优化得到大肠杆菌惯用的密码子,反转录后得到Myo全序列,并利用两步法合成Myo全基因；2.表达载体构建：将Myo片段并与pMD18-T Simple载体相连,得到重组质粒Myo-pMD18-T Simple。利用Myo-pMD18-T Simple上特异性酶切位点,将Myo片段进行酶切胶回收,并与原核表达载体pET-28a连接,获得可用于原核表达的重组质粒Myo-pET-28a;3.重组蛋白的表达和纯化：利用Myo-pET-28a转化表达型感受态细胞BL21(DE3),获得表达菌株,并对表达条件进行优化。在最佳诱导温度、时间、浓度下进行IPTG诱导表达,最终得到Myo-His融合蛋白。利用镍柱对Myo-His融合蛋白进行纯化,经透析浓缩得到纯化蛋白；4.单克隆抗体制备：用血清提纯的人肌红蛋白抗原免疫小鼠,经过细胞融合及筛选得到22株分泌特异性抗体的细胞株。再经亚克隆筛选,最终获得5株抗体分泌量高亲和力强的细胞株；5.单克隆抗体鉴定：利用本实验中得到的Myo纯化抗原经Western Blot检测结果显示,所筛选的5株抗体中,除一株抗体(编号为#16-3.3)与Myo表达纯抗原反应较弱以外,其他4株抗体(编号为#14-4.3、#17-1.2、#18.2和#19-2.3)皆能与Myo表达纯抗原反应,以此筛选获得高亲和力和高特异性的单克隆抗体：经夹心ELISA检测,#17-1.2可分别与其它3株抗体进行夹心对配。上述研究表明,本研究成功筛选获得高敏感性及特异性的Myo单克隆抗体。该项研究为建立检测人类心脏疾病,尤其是急性心肌梗塞的临床检测试剂盒的制备奠定了基础。此外,上述单克隆抗体可进行夹心配对实验,适用于未来抗体芯片的研发制备中,为一种新的联合快速诊断心脏疾病方法的建立提供了科学依据。