目的：肾细胞癌是泌尿系统常见肿瘤之一，约占所有实体肿瘤的3％，具有高转移性、强免疫性的特点。目前肾癌最有效、最标准的治疗仍是根治性肾切除术，其它辅助治疗尚不能改善肾癌患者的术后生存率。转移性肾癌的治疗仍是临床难点之一。近年来肿瘤免疫治疗作为一种科学合理的辅助治疗模式而备受关注，基于热休克蛋白gp96的肿瘤疫苗正是目前研究热点之一。研究表明，自体肿瘤源性的热休克蛋白gp96-肽复合物能够激发肿瘤特异性的记忆性T细胞免疫应答，这为其作为一种肿瘤疫苗提供了必备条件。同时发现gp96与肽的非共价结合既无选择性也不受细胞类型的限制，代表了所有细胞肽库，由于正常组织和肿瘤组织间抗原肽表位的差异以及同种类型肿瘤间肿瘤特异性突变的随机性引起的差异导致纯化的gp96-肽复合物仅对自体源性的肿瘤能引起有效的免疫应答。因此gp96-肽复合物是一种真正意义上的个体化肿瘤疫苗。但是，由于组织来源的限制以及纯化工序的繁杂，难以进行工业化生产。目前已证实，在gp96—肽复合物中起肿瘤免疫作用的是抗原肽而不是gp96。因此对肾癌治疗中gp96-肽复合物疫苗真正起作用的多肽具体成分的分析和鉴定有待于进一步深入研究。这些研究对寻找一种有效的肿瘤肽疫苗和人工化生产gp96—抗原肽复合物疫苗具有积极的意义。本研究通过纯化。肾细胞癌组织中的gp96—肽复合物，并测定、分析与gp96结合的多肽的氨基酸序列，为进一步了解抗原肽结构、探讨相关作用机理及人工免疫治疗奠定基础。方法：第一部分，利用硫酸铵分级盐析法结合亲和层析和离子交换层析技术从手术中获取的肾细胞癌组织中纯化gp96—肽复合物，利用gp96单克隆抗体和Western-blot技术对其进行鉴定并应用BCA法测定浓度。第二部分，通过酸洗脱法得到gp96结合肽，收集肽液经C18反相HPLC柱分析制备，首先利用基质辅助激光解析电离飞行时间质谱仪测定与gp96结合的多肽的分子量，并利用毛细管电喷雾四极杆飞行时间串联质谱仪测定其氨基酸序列。最后登陆网站利用MASCOT软件查询多肽的来源。结果：第一部分(1)利用硫酸铵分级盐析法结合亲和层析和离子交换层析技术可以从肾细胞癌组织中纯化出gp96—肽复合物，并为western-blot所证实；(2)每克肾细胞癌组织可获得20—50微克的gp96—肽复合物。第二部分(1)与gp96结合的多肽分子量范围为1046.48-3501.56Da之间；(2)测定出其中两个多肽的氨基酸序列分别为LVPLEGWGGNVM和PPVYYVPYVVL；(3)根据测定所得肽段的氨基酸序列未查到其相关的蛋白来源。结论：(1)利用硫酸铵分级盐析法结合亲和层析和离子交换层析技术可以从肾细胞癌组织中纯化出gp96—肽复合物；(2)与gp96结合的多肽为一些小分子肽，氨基酸序列为LVPLEGWGGNVM和PPVYYVPYVVL的多肽可能是肿瘤抗原肽，是否可以制备为肽疫苗需进行进一步的检测和分析。