【摘 要】
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参与组织器官着色的基因多达370余个,着色过程主要是受黑素皮质素受体-1/鼠灰色基因/α-黑色素细胞刺激素信号通路、Wnt/β-catenin信号通路、干细胞因子(SCF)/c-Kit信号通路和内皮缩血管肽/PKC信号通路中的黑素皮质素受体1、小眼畸形相关转录因子、酪氨酸酶家族、α-促黑素细胞激素、Agouti信号蛋白等基因的调控。本研究在前期对酉州乌羊和渝东白山羊皮肤组织进行小RNA测序发现mi
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参与组织器官着色的基因多达370余个,着色过程主要是受黑素皮质素受体-1/鼠灰色基因/α-黑色素细胞刺激素信号通路、Wnt/β-catenin信号通路、干细胞因子(SCF)/c-Kit信号通路和内皮缩血管肽/PKC信号通路中的黑素皮质素受体1、小眼畸形相关转录因子、酪氨酸酶家族、α-促黑素细胞激素、Agouti信号蛋白等基因的调控。本研究在前期对酉州乌羊和渝东白山羊皮肤组织进行小RNA测序发现miR-29a-5p为差异表达基因的基础上,建立了山羊miR-29a-5p的组织表达谱,并比较分析了酉州乌羊(乌皮)与白山羊不同组织miR-29a-5p的表达情况;接着检测了miR-29a-5p和黑色素相关基因在黑色素瘤细胞(B16f10)系中的表达特性;其次通过MTT实验、划痕实验、黑色素含量检测等实验检测转染miR-29a-5p mimic和inhibitor对黑色素细胞生理功能的影响;最后通过靶基因预测和双荧光素酶验证miR-29a-5p与Asip、Kitl之间的靶关系。主要研究结果如下:1.miR-29a-5p在山羊心、肝、脾、肺、肾、腿肌、皮肤、大脑中均有表达,其中在大脑中表达量最高,在皮肤和肺脏组织中表达量最低;在酉州乌羊皮肤miR-29a-5p表达量极显著低于渝东白山羊(P<0.01)。2.miR-29a-5p的表达量随着B16f10细胞培养时间的延长呈递增趋势。但在分化第4、6、8天的细胞中miR-29a-5p表达量差异不显著(P>0.05),但都低于分化第2天的表达量(P<0.01)。3.miR-29a-5p模拟物和抑制剂对细胞活率生成影响差异显著(P<0.05),对细胞黑色素生成影响差异不显著(P>0.05)。转染miR-29a-5p模拟物促进细胞增殖迁移,对黑色素细胞的分化影响表达差异不显著(P>0.05);抑制miR-29a-5p表达使Pax3基因mRNA表达量显著升高(P<0.05)。4.通过双荧光素酶检测显示miR-29a-5p与Asip基因并不存在靶关系,而miR-29a-5p与Kitl基因存在靶向关系。研究结果表明,miR-29a-5p在黑色素沉积较深的乌皮中呈低表达与黑色素沉积呈负相关,暗示抑制miR-29a-5p促进黑色素沉积。过表达miR-29a-5p促进细胞增殖与迁移。此外,miR-29a-5p可以靶向结合Kitl 3’UTR上的靶位点调控该基因的表达。
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