热能可引起烧伤部位即刻而不可逆性的坏死，邻近该部位未直接烧伤部位也可产生损伤，而且损伤程度进行性加重，不断加深扩大，最终导致组织坏死。这种现象的发生不仅加重了患者的病情，而且增加烧伤的致残率及致死率，是烧伤治疗面临的问题之一。封闭负压引流(vacuum-assisted closure，VAC)疗法是利用负压吸引装置与特殊敷料结合后，在创面处产生低于大气压的压力，促进创面愈合的技术，已广泛应用于各类创面的治疗。有研究证明封闭负压引流治疗可逆转烧伤瘀滞区，减少烧伤创面损伤深度及坏死面积，但缺乏进一步的机制研究。在烧伤瘀滞区进行性坏死过程中，血管内皮细胞既是损伤的主要靶细胞，也是病理进展的效应细胞。有效的保护血管内皮细胞，减轻其损伤及功能失常是逆转烧伤瘀滞区的关键。自噬是指细胞消化自身多余、受损、衰老的蛋白质及细胞器，以维持内环境稳定的细胞机制。本课题以大鼠梳状烧伤模型应用封闭负压引流技术进行治疗，从内皮细胞功能和自噬水平的变化，初步探索VAC技术治疗烧伤瘀滞区的效果和作用机制，为临床治疗提供理论依据。实验共分以下四个部分：1.建立大鼠铜梳烧伤模型。铜梳梳齿间未直接烧伤的间隙区即为瘀滞区。实验动物随机分为VAC组和对照组。对瘀滞区摄像，用图像分析软件，测量烧伤瘀滞区坏死面积的变化。HE染色观察瘀滞区坏死深度。结果显示：烧伤6小时后VAC组烧伤瘀滞区坏死面积及深度明显小于对照组。2. NO和ET-1含量检测。我们用硝酸还原酶法检测瘀滞区组织的一氧化氮（NO）的含量，用ELISA法检测内皮素-1(ET-1)水平，对比VAC组和对照组之间两者比值的差异，分析VAC对血管内皮细胞分泌功能的影响。结果显示：烧伤后VAC组瘀滞区组织NO含量明显多于伤前对照组，伤后12小时达到峰值，72小时仍高于正常值。对照组中NO含量低于VAC组，伤后6小时达到峰值，12小时即降低到正常含量以下，并持续下降。两组伤后6小时及其后各时间点差异有统计学差异；烧伤后早期VAC组烧伤区瘀滞组织中ET-1含量较伤前对照组明显上升，伤后24小时达到峰值，48小时后低于正常值。对照组烧伤瘀滞区组织中ET-1含量也上升，但上升程度低于VAC组，伤后6小时达到峰值，伤后12小时即降低到正常值以下。两组伤后6、12、24小时差异有统计学意义（P＜0.05）。伤后早期VAC组ET-1/NO比值较低，12小时到达最低值后逐步回升，接近正常值。而对照组ET-1/NO比值持续升高，在72小时仍很高。两组伤后6小时及其后各时间点差异均有明显差异（P＜0.05）。3. TM（血栓调节蛋白）和TM mRNA检测。用免疫组化染色和实时荧光PCR检测内皮细胞TM和TM mRNA表达，分析VAC治疗对血管内皮细胞抗凝血、抗炎功能的影响。结果显示：伤后各时间点VAC组瘀滞区组织均可见TM阳性表达。对照组伤后12小时可见TM阳性表达，但伤后24小时及其后时间点均为阴性。伤后各时间点，两组TM mRNA表达均呈下降趋势，但VAC组表达量高于对照组。伤后6小时及其后各时间点差异明显（P＜0.05）。4. LC3和Beclin-1表达检测。免疫组化染色观察烧伤瘀滞区LC3及Beclin-1的表达，对比VAC组与对照组之间的差异，分析VAC治疗对烧伤瘀滞区细胞自噬的影响。结果显示: VAC组瘀滞区LC3和Beclin-1表达率伤后6至24小时低于对照组，伤后48至72小时高于对照组，半定量分析显示两组在伤后6小时及其后各时间点差异有统计学意义（P＜0.05）。