FcγRs在HBV感染不同阶段中各免疫细胞上表达比例的差异

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背景及目的:为了区别慢性乙型肝炎免疫活化期及慢性乙型肝炎免疫耐受期,本课题组前期使用HBV不同阶段感染者的外周血单核细胞(PBMC)进行全基因组表达谱芯片分析,发现HBV感染者各组间Fcγ表达有显著统计学差异。随后的PCR实验验证了基因芯片的结果。本文旨在从蛋白表达水平研究活化型FcγR与抑制型FcγR在慢性乙型肝炎免疫清除期和免疫耐受期之间的差异。方法:采用多色流式细胞仪对31例慢性乙型肝炎免疫活化期患者,16例慢性乙型肝炎免疫耐受期患者,7例乙肝感染成功清除患者,20例健康者进行检测,主要检测外周血中NK细胞表面FcγRⅢ (CD16)、B细胞表面FcyRⅡ(CD32)、单核细胞表面FcyRⅠ (CD64)、FcγRⅡ (CD32)、FcγRⅢ (CD16)的比例以及辅助T淋巴细胞、细胞毒T淋巴细胞的比例。采用BD流式液相多重蛋白定量技术检测研究对象血浆中IL-1β、IL-10、MIP-1β、IL-12p70、TNF、IL-6因子水平。非正态分布计量资料使用秩和检验(Mann Whitney test)分析任意两组间数据。相关性分析采用Spearman法。结果:1、慢性乙型肝炎免疫活化期组CD3-CD56+CD16+NK细胞比例明显低于慢性乙型肝炎免疫耐受期组(中位数6% vs 13.22%,P=0.001)和健康对照(中位数6% vs 17.62%,P<0.001)。乙肝感染成功清除组患者CD3-CD56+CD16+NK细胞亚群较健康对照组明显减少(中位数5.66%vs 17.62%,P=0.002)。2、慢性乙型肝炎免疫活化期组患者CD3-CD19+CD32+B细胞较慢性乙型肝炎免疫耐受期组(中位数11.68%vs 7.28%,P=0.008)及健康对照组(中位数11.68%vs 7.28%,P=0.008)升高。免疫活化期组CD3CD5+CD32-B细胞较健康对照组(中位数3.37% vs 1.46%,P=0.002)升高。免疫活化期组CD3-CD19+CD5-CD32+B细胞比例较免疫耐受期组升高(中位数7.77% vs 5.22%,P=0.004)。免疫活化期组CD3-CD19+CD5+CD32+B细胞比例较健康对照组升高(中位数3.26% vs 1.34%,P=0.006)。CD3-CD19+B细胞、CD3-CD5+B细胞、CD3-CD19+CD5B细胞、CD3-CD19+CD5+B表面的CD32表达百分比组间比较无统计学差异(P>0.0083)。3、慢性乙型肝炎免疫活化期组CD14highCD16+单核细胞较免疫耐受期组(中位数8.04% vs 4.84%,P<0.001)和健康对照组(中位数8.04% vs 3.59%,P<0.001)升高,差异有显著统计学意义。CD14+CD32+、CD14+CD64+单核细胞在组间比较无明显统计学差异(P>0.0083)。乙肝感染成功清除组患者CD14highCD16+单核细胞较健康对照组升高(中位数7.96% vs 3.59%,P=0.002),差异有统计学意义。4、单核细胞亚群CD14highCD16+与ALT呈显著正相关(r=0.694,P<0.001),与AST呈显著正相关(r=0.698,P<0.001),与血清HBsAg呈显著负相关(r=-0.614,P<0.001),与血清HBVDNA低度负相关(r=-0.446,P=0.0017)。5、细胞因子变化情况:免疫活化期组血清中IL-6、IL-10、IL-1β、TNF、 MIP-1β、IL-12p70因子水平较免疫耐受期组(P<0.001, P<0.001, P<0.001, P=0.001, P<0.001, P<0.001,)和健康对照组(P=0.001, P<0.001, P<0.001, P=0.001, P<0.001, P<0.001)明显升高。结论:1、本实验证实了前期HBV不同感染时期全基因组表达谱芯片的结果和FcyRs的RT-PCR实验—HBV感染不同免疫状态下FcyRs存在差异性表达。2、FcyRs在慢性HBV感染不同时期的不同免疫细胞上的差异可能是反应免疫清除状态的指标之一。
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