坛紫菜多糖的提取纯化及其理化性质研究

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坛紫菜(Porphyra haitanensis)俗名乌菜,是一种产于我国南方地区的重要经济红藻,主要在福建、浙南沿海等地种植。本文对坛紫菜多糖的提取工艺、多糖的分离纯化工艺、多糖的结构组分分析、螯合剂脱除多糖中金属及抗氧化性性质进行了研究。本文选取采集于晋江的坛紫菜为研究对象,将其粉碎过目。以多糖的提取率为指标,通过单因素温度、时间、固液比与正交实验确定了热水提取的最佳工艺参数为:浸提温度100℃,浸提时间5h,固液比1:30,在此优化条件下得到多糖提取率为14.5%;用乙醇沉淀多糖时乙醇的较好终浓度为80%。在用热水提取坛紫菜粗多糖中一部分蛋白质会随多糖沉淀下来,本文对Sevag法、TCA法、碱性蛋白酶法及木瓜蛋白酶法去除坛紫菜粗多糖中的蛋白质进行了比较,使用这四种脱蛋白方法的脱除率分别为59%、65%、94%、88%,研究结果表明,酶法脱蛋白的效果好且多糖的损失较少。采用阴离子交换柱DEAE Cellulose-52对坛紫菜多糖进行分级分离,依次用蒸馏水、0.1、0.2、0.3、0.5和1mol/L NaCl溶液分段梯度洗脱,得到六种组分多糖,经由0.2、0.3、0.5mol/L NaCl洗脱组分进行收集,经Sephadex G-100进一步纯化,收集各主要洗脱峰得到精制多糖,分别命名为SP1、SP2、SP3。经紫外光谱分析表明上述三种多糖均为较纯的多糖组分,并测定三种多糖的硫酸根含量、半乳糖含量、3,6-内醚-L-半乳糖含量、糖醛酸含量,其中三种天然紫菜多糖中半乳糖含量分别为34.35±1.13%、31.75±1.19%、28.01±0.41%,3,6-内醚半乳糖含量相对较低,含量分别为6.84±0.43%、4.99±0.24%及4.56±0.36%。紫菜多糖不同程度被硫酸化,三种天然紫菜多糖硫酸根含量分别为8.54±0.44%、10.24±0.23%及12.35±0.58%。通过气相色谱分析、红外光谱对其单糖组成及其结构进行研究,结果表明,组分SP1中单糖组成主要为半乳糖,并有少量的鼠李糖、岩藻糖、阿拉伯糖、木糖,峰面积百分比为96.5321:1.225:0.857:1.376:1.165。组分SP2,SP3单糖组成只有半乳糖。3种组分中都含有硫酸基,组分SP1在932cm-1处有明显吸收峰,表明3,6-内醚半乳糖较高;组分SP2,SP3在932cm-1处有弱吸收峰,表明3,6-内醚半乳糖含量较底。此外三种多糖均在893cm-1附近出现吸收峰,说明均含有β-D-半乳糖,存在β-糖苷键,在816cm-1处的吸收峰表明硫酸根的位置均在C6位上。结果表明,超滤能去除大部分多糖中的金属,酸对多糖的去金属离子影响较大。在较酸条件下,结合超滤对脱除金属Mn、Zn、As、Cd、Pb的去除率较高,Mg、Hg、Fe、Ba的去除效果不理想。在同样酸性条件加入竞争性螯合剂EDTA,则具有一定的脱除效果,但是不是很明显。测定坛紫菜粗多糖、SP1、SP2和SP3四种多糖的体外抗氧化活性,SP1、SP2、SP3、粗多糖对·OH自由基的半数抑制浓度(IC50)分别为1.32mg/mL、1.05mg/mL、0.88mg/mL、0.80mg/mL;对DPPH自由基的IC50值分别为1.82mg/mL、1.90mg/mL、1.69mg/mL、0.88mg/mL;对脂质过氧化体的IC50值分别为2.01mg/mL、1.82mg/mL、1.59mg/mL、1.29mg/mL,而对·O2-的抑制作用并不显著。
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