片形吸虫病(Fasciolasis)是一种严重的全球性人兽共患食源性寄生虫病,其病原体主要为复殖目(Digenea)片形科(Fasciolidae)片形属(Fasciola)的肝片形吸虫(Fasciolahepatica 和大片形吸虫(Fasciola giganica)。这两种虫体均呈世界性分布,但温带地区以肝片形吸虫为主,而大片形吸虫则以热带地区为主。林宇光等(1974)报道两种片形吸虫在我国牲畜中普遍感染,肝片形吸虫较为普遍,大片形吸虫则较局限,东北、华北、西北、华中等地区以肝片形吸虫为主要病原,华东、华南诸省更为严重,福建省各县,特别是沿海各县,两种片形虫病均有流行。多年研究表明我区分布的种类主要为大片形吸虫。片形吸虫病每年在世界范围造成超过32亿美元的畜牧业损失,并有240多万人受到感染1.8亿人的健康受到威胁。因此,在面对大批量血样的检测时,省时省力省材的间接ELISA多样本检样方法就会更有优势。本文主要研究大片形吸虫多样本检测方法并对广西部分地区牛感染大片形吸虫的情况做一调查。首先摸索间接ELISA方法检测牛血清中抗体的最佳条件,再调查广西部分地区大片形吸虫感染情况,最后建立间接ELISA多样本检测方法。由于奶牛与水牛品种不同,对实验方法的条件要求也有所不同,故针对检测奶牛和水牛血清中抗体的间接ELISA方法进行了最佳条件的优化。阳性对照的血清采自南宁屠宰场的胆囊中发现有大片形吸虫感染的牛,阴性对照采自广西大学农大奶场出生一周内的小奶牛和小水牛,棋盘法优化得出的结果:两者的ES分泌排泄抗原的最佳工作浓度均为1.6μL/mL,奶牛的血清与酶标二抗的最佳工作条件为1:400和1:10000,水牛的血清与酶标二抗的最佳工作条件为1:200和1:20000。随后用优化好的间接ELISA方法检测了来自南宁,柳州,百色,崇左,贺州五个地区的奶牛以及水牛的1000多份血清样本。按血清检测结果的阴阳性以及OD值分类,作为大片形吸虫间接ELISA多样本混合检测方法的实验材料。按优化好的间接ELISA方法的条件来混合检测多个样本,做大量重复试验,以确定间接ELISA多样本检测方法与间接ELISA方法是否具有一致性及其可行性。结果显示,当检测样本中有百分之三十的阳性率时,即可检测出阳性结果。