【摘 要】
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本实验室以无胚乳家榆(Ulmus pumila L.)、有胚乳侧柏(Platycladus orientalis(Linn.)Franco)种子为试材,运用光学显微镜、电子显微镜观察、应用原位检测细胞凋亡最敏感TUNEL
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本实验室以无胚乳家榆(Ulmus pumila L.)、有胚乳侧柏(Platycladus orientalis(Linn.)Franco)种子为试材,运用光学显微镜、电子显微镜观察、应用原位检测细胞凋亡最敏感TUNEL等技术研究人工老化过程中种子衰老机制。结果显示:经过六天老化的家榆种子发芽率和活力指数几乎为零。老化第一天胚根的根冠组织开始出现棕色凋亡细胞,在接下来两天中根冠细胞几乎全部发生凋亡。最早的凋亡细胞还出现在表皮原。虽然老化第三天时种子有相对较高的发芽率,但其活力指数却陡然下降至原来的一半以下,检测表明生长点、子叶和胚轴部分细胞开始出现凋亡核,但细胞完整,说明说明随着老化程度加深一些种子可以正常萌发,却不能继续生长。至第六天,部分凋亡细胞开始出现崩解,表现为细胞核变长并依附在细胞壁上,细胞膜的保护能力下降,胞质收缩,出现真菌感染。
目前已经有多项研究证实了植物PCD过程中Ca2+的重要作用,但用外源Ca2+作为诱导剂对家榆种子进行处理后发现,虽然随着所处理的Ca2+浓度梯度递增其种子活力逐渐降低,与无胚乳的家榆种子老化时的表现相似,但TUNEL法检测结果显示外源Ca2+处理的种子细胞中并未出现细胞凋亡,表明了外源Ca2+处理种子所引起的活力下降与PCD无关。
侧柏种子在39℃高温高湿的人工老化条件下14天后种子发芽率几乎为零。TTC染色结果显示,在人工加速老化过程中侧柏种子的子叶细胞活力首先减弱,而后随着老化时间延长失去活力的细胞遍布整个胚,导致种子最终死亡。经过光学显微镜观察进一步证明了以上结论,随着老化时间逐渐延长,侧柏种子子叶细胞核被甲苯胺蓝染色变淡,细胞质中空泡增多,细胞间的界线模糊,在老化第14天的种子子叶中几乎看不到完整的细胞,细胞核变形。关于侧柏种子在老化过程中是否存在PCD有待进一步研究。
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