目的建立全自动二维色谱法(2D-HPLC)测定人血清中伏立康唑浓度的方法,并使用该方法进行伏立康唑药物浓度监测,并使用微测序试剂盒检测CYP2C19基因型多态性,分析伏立康唑血药谷浓度和患者CYP2C19基因多态性与治疗效果及安全性的关系,为临床合理使用伏立康唑提供参考。方法(1)第一维色谱柱为ASTON SC2柱(4.6 mm×25 mm,5μm),流动相为20 mmol/L磷酸铵:乙腈:甲醇=3∶1∶1(V∶V∶V,磷酸调pH=5.4),流速1.2 mL/min;第二维色谱柱为SHIMADZU C18柱(4.6 mm×150 mm,5μm),流动相为10 mmol/L醋酸铵(三乙胺调pH7.0)∶10 mmol/L醋酸铵(三氟乙酸调pH3.0)∶甲醇∶乙腈=30∶10∶10∶50(V∶V∶V∶V),流速1.0 mL/min;中间色谱柱为ASTONSH柱(3 mm×10 mm,5μm),辅助流动相为纯水。通过一维色谱柱萃取样品,经中间柱捕获目标物并转移至二维色谱柱分析,检测波长256 nm,柱温40℃,进样量200μL。(2)使用该伏立康唑血药浓度检测方法,测定2018年3月-2019年2月院内送检的伏立康唑血药浓度,并使用微测序试剂盒检测CYP2C19基因型多态性。按照纳入标准与排除标准筛选纳入研究的患者,并使用拟定的安全性和有效性评价标准进行研究。使用ECXEL 2016对CYP2C19基因型进行Hardy-Weinberg遗传平衡检验,使用SPSS21.0对数据进行统计学分析。结果(1)建立了2D-HPLC检测伏立康唑血药浓度的方法,伏立康唑在0.28~22.56μg/mL范围内线性关系良好,r=0.9999,最低定量限为0.28μg/mL,方法回收率为99.01%~104.62%,提取回收率为85.81%~89.82%,日内、日间精密度RSD均小于9%。室温24h,反复冻融及长期冻存稳定性考察RSD<9%,符合血清样品检测要求。(2)共纳入患者57例,其中男性35例,女性22例,年龄67.7±14.77岁,体重56.65±9.56 kg,伏立康唑血药谷浓度对临床疗效的影响无统计学意义(P>0.05),对安全性的影响有统计学意义(P<0.05)。57例患者中EM型患者28例,IM型患者27例,PM型患者2例,基因型频率均符合Hardy-Weinberg平衡,结果表明,EM,IM和PM的血药谷浓度分别为2.78±1.56,3.09±1.39和7.09±0.16μg/mL。EM与IM之间的血药谷浓度无显着差异(P>0.05)。PM与EM或IM之间的血药谷浓度存在显着差异(P<0.05)。EM,IM和PM的治疗有效率分别为82.14%,77.78%和100.00%,不良反应发生率分别为3.57%,7.41%和100.00%。通过Fisher确切概率检验发现,CYP2C19基因多态性对伏立康唑安全性的影响具有统计学意义(P<0.05),但CYP2C19基因多态性对伏立康唑有效性的影响无统计学意义(P>0.05)。最优尺度回归发现CYP2C19多态性所致的代谢差异是影响伏立康唑血药谷浓度的重要因素。(3)发现了一例利福喷丁与伏立康唑联合使用发生相互作用的案例,该患者合用使用两药后,伏立康唑血药浓度低至0.415μg/mL。结论(1)建立的2D-HPLC检测伏立康唑血药浓度的方法操作简单、准确、灵敏,符合生物样品的测定要求,适用于伏立康唑临床血药浓度测定。(2)伏立康唑的血药浓度对安全性的影响有统计学意义,CYP2C19基因多态性对伏立康唑安全性的影响有统计学意义,也是影响伏立康唑血药浓度的重要因素。(3)利福喷丁与伏立康唑联合使用可能发生相互作用,因此应避免二者联合使用,当存在治疗矛盾时,临床工作中应根据实际情况选用其他抗真菌药如两性霉素B,棘白菌素类等药物。当必须选用伏立康唑时,患者的抗结核方案应不含有利福霉素药物。