复方救必应胶囊是一种中药复方制剂,由救必应、香附、东风桔三味中药材组成,其主要功效为利湿止痛、清热解毒,常用于治疗肠胃炎和腹泻。复方救必应胶囊中所含的香附药材具有止痛、抗炎、镇静、解热的功能,与其他草药合用可以治疗腹痛和肠道疾病。香附的主要活性成分包括:α-香附酮、香附烯酮、圆柚酮,三者互为同分异构体。本文利用液相色谱-串联质谱技术(LC-MS/MS),建立了同时测定复方救必应胶囊中α-香附酮、香附烯酮、圆柚酮的含量的方法,并进行了含量测定。另外,还建立了同时测定大鼠血浆中α-香附酮、香附烯酮、圆柚酮的方法学并成功运用到了大鼠体内的药代动力学研究中。因发现香附烯酮在大鼠体内存在雌雄代谢差异,进而分别做了雌雄大鼠肝微粒稳定性实验以验证体内药代结果。具体如下:(1)建立了同时测定复方救必应胶囊主要提取物中α-香附酮、香附烯酮、圆柚酮三种同分异构体含量的LC-MS/MS方法,并根据要求,进行了系列相关项目的方法学验证,主要包括:仪器精密度、线性范围、重复性、稳定性、加样回收率等,其结果皆符合定量分析的相关要求。实验测得三批复方救必应胶囊提取物中α-香附酮、香附烯酮、圆柚酮的平均含量分别为437.9、848.8、43.0μg/g。该方法具有操作简便、选择性好、灵敏度高、结果准确可靠等优点,适用于这三个同分异构体化合物的含量测定。(2)建立了同时测定大鼠血浆中α-香附酮、香附烯酮、圆柚酮三个同分异构体化合物的LC-MS/MS方法,并根据相关要求,对系列项目进行了方法学的验证,主要包括:选择性、线性范围、精密度、准确度、稳定性、回收率和基质效应等。最终结果显示:α-香附酮和香附烯酮的定量下限为1 ng/mL,线性范围为1~500 ng/mL;圆柚酮的定量下限为5 ng/mL,线性范围为5~2500 ng/mL。其日内精密度、日间精密度、准确度、稳定性皆符合生物样品定量分析方面相关要求,其回收率均在88~115%之间,该方法灵敏度高、选择性好、分离度较高,可用于复方救必应胶囊提取物中三个同分异构体化合物在大鼠体内的药代动力学研究。(3)采用LC-MS/MS方法测定大鼠给予复方救必应胶囊提取物后三个同分异构体化合物的血药浓度,分别考察并比较了雌雄大鼠经单剂量静注(0.3 g/kg)和单剂量口服(3.0 g/kg)复方救必应胶囊提取物后目标化合物在大鼠体内的药代动力学特征。结果显示:雌性和雄性大鼠经静脉注射给予复方救必应胶囊提取物后,三个同分异构体化合物血药浓度都开始迅速下降,未见显著的雌雄差异。雌性和雄性大鼠灌胃给予3.0 g/kg的复方救必应胶囊提取物后,香附烯酮的体内药代情况存在显著差异,且雄性大鼠口服复方救必应胶囊提取物后吸收代谢太快,未能测到有效血药浓度值。(4)采用底物消除法研究α-香附酮、香附烯酮、圆柚酮分别在雌雄大鼠肝微粒体系中的代谢稳定性及其差异,结果显示香附烯酮在雌性肝微粒体系中代谢较慢而在雌性肝微粒体系中代谢较快,存在明显的雌雄差异。而α-香附酮、圆柚酮在雌雄大鼠肝微粒体系中的代谢稳定性未表现出明显差异。