本研究以人生长激素基因和人激肽释放酶基因作为目的基因，利用胚盘显微注射法和精子介导外源基因转移法制备转基因鸡，其结果如下： 1．胚盘显微注射法关键技术之一是蛋壳恢复共封闭性，为此进行的种蛋部分去壳后8种不同的封口方法对孵化率的影响实验结果表明：①蛋壳膜+封口胶(封口后连续3天注射抗生素)、②蛋壳膜+封口胶、③封口胶+药棉、④蛋壳膜+石蜡、⑤蛋壳膜+蛋壳粉+石蜡⑥蛋壳膜、⑦蛋壳膜+蛋壳粉+蛋清、⑧蛋壳膜+蛋壳粉，8个试验组鸡胚到5胚龄时存活率分别为42.6％、53.1％、42.2％、41.5％、43.2％、33.3％、37.5％、37.5％，组间差异不显著((?)＞0.05)；11胚龄时，⑥、⑦两组均都已夭亡，①、②、③、④、⑤、⑧组存活率分别为31.9％、22.4％、26.7％、26.8％、20.5％、12.5％，六组间差异仍不显著((?)＞0.05)；前5种封口方法中鸡胚的发育在19胚龄前差异不显著((?)＞0.05)，存活率分别为：9.6％、5.1％、6.7％、7.3％、6.8％，此时后3种封口方法，胚胎均已死亡；其中前4组的孵化率分别为：9.6％、5.1％、4.4％、2.4％。比较结果，前5种封口方法优于后3组，其中蛋壳膜+封口胶方法较其它封口方法好。 2．在以人生长激素基因为目的基因进行胚盘转染试验中，一次注射受精卵81枚，孵出小鸡4只，孵化率为4.9％。对孵化后死亡及孵出活鸡进行斑点杂交检测，结果表明：基因整合率约为12.5％(6/48)。在死亡的鸡胚中，1只出扬州大学硕士学位论文现腺胃肿大异常。 3.以人激肤释放酶为目的基因进行胚盘注射239枚受精卵，采用蛋壳膜+封口胶封口，孵出小鸡14只，孵化率为5.9%。对孵化后4一7胚龄的整胚及7胚龄后死亡鸡胚的肝、脑、肾、性腺、脾、心、肺、皮肤和活鸡的血液皮肤进行检测，斑点杂交阳性率为22.2%，对可疑阳性和出雏鸡的组织器官PCR检测，阳性率为3.7%。其中1只15一16胚龄的死胚腺胃有出血点，l只16胚龄的死胚肝脏异常肿大。出壳雏鸡1只脚瘫，不能直立。7只在发育到1.5左右千克食欲减退废绝，消瘦而死，解剖发现胆囊肿大，肝肠部分发绿坏死。这可能与早期试验饲养状况不好有关，而且对试验鸡未进行剖检分析不能排除疾病的可能性。但也从另一方面说明胚盘显微注射法制备转基因鸡，外源基因的随机插入可能导致内源性基因的破坏或失活，也可能激活正常情况下处于关闭状态的基因或在插入位点发生染色体的畸变而引起个体异常。 实验结果表明hGH、Klkl两种基因均可在鸡中获得整合表达，也说明在一定的范围内，不同质粒，不同片段大小的外源基因通过脂质体包埋，利用胚盘显微注射法均可获得转基因鸡，胚盘显微注射法是转基因鸡制备的一条有效途径。 4.在用精子介导法进行鸡的转基因研究中，对鸡精子的采集、稀释、体外培养和基因转染的条件进行了摸索，转染后的精子活力与对照组差别不显著，PCR检测结果证明37℃孵育1小时，精子活力良好，并携带有外源基因。以人激肤释放酶为外源基因通过精子介导法获得的24只鸡，斑点杂交阳性率为79.2%(19/24)，PCR检测获得29.2%(7124)的阳性率，提示精子与DNA一脂质体复合物共孵育，也可用于转基因鸡的研究。