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钩虫感染仍为当今人体重要的肠道寄生虫感染之一,严重危害人们尤其农民和矿工的身体健康。作者从2005年3月至2009年1月,完成了以下几个部分调查和研究,以期阐明闽南城乡和矿区人体钩虫病的流行病学特征,并对钩虫的生物学及分子生物学进行研究,为设计防治措施提供科学依据。获得了以下主要研究结果:
1.闽南城乡人体肠道寄生虫调查:在厦门、漳州、龙岩和南平等4市调查13个点,共检查了13314人,检出钩虫、蛔虫、鞭虫和蛲虫等肠道寄生虫,总感染率10.31％,感染人数分别为1070、98、33和172,感染率依次为8.04％、0.74％、0.25％、1.29％,构成比分别为77.91％:7.17％:2.42％:12.50％。其中,发现厦门市同安区莲花镇美埔村钩虫感染率为40.00％(40/100),为钩虫重度流行区。证明:在闽南城乡,人体钩虫感染仍较严重。
2.闽南城乡及矿区人体钩虫流行病学特征:
(1)散发性特征:调查发现,重度和中度感染钩虫的病例多以散发的形式发生,归为两类:第一类为外来务工人员集中区,如矿工和居住在城乡接合部等种植蔬菜、水果的外来民工；第二类是少部分本地50岁以上的中、老年人。
(2)和性别、年龄关系:男、女钩虫感染差异显著(X2=4.189,P＜0.05)。同时,钩虫感染率有随年龄的增长而升高趋势,感染年龄最小的8个月,最大的89岁,均为女性。各年龄组钩虫感染率差异显著(X2=758.90,P＜0.05)。年龄与感染率之间的统计分析,呈正相关,年龄与感染率两变量间高度相关,回归系数经显著检验有差异显著(r=0.9800,P＜0.05)。50岁以上人群中中度和重度感染的比例较大,分别为88.16％,84.10％。由此可见,钩虫对50岁以上中、老年人身体危害较大,应予特别关注。
(3)虫种特征:261份钩虫虫卵阳性粪便培养结果表明:闽南城乡系以美洲钩虫为主的2种人体钩虫即美洲钩虫和十二指肠钩虫混合感染流行区,美洲钩虫感染占绝大多数；而来闽务工的外省籍人口,包括江西,四川、湖北、浙江、安徽等,以十二指肠钩虫为主,稍高于美洲钩虫。
(4)和职业关系:以从事种植蔬菜、水果(草莓、龙眼)、园林绿化、垃圾填埋职业的来厦民工钩虫感染率最高,达到33.99％。文化程度以初中感染率为最高,6岁以下及大专以上最低,文化程度的差异显著(X2=107.02,P＜0.05)。
A.漳平煤矿矿工钩虫重度感染占感染者总数83.33％,邵武煤矿矿工钩虫中度、重度感染分别占感染者总数25.00％,8.33％,表明:钩虫病至今仍然是矿区流行最广的、危害最严重的肠道寄生虫病。矿区土壤污染以煤土、菜地钩蚴居多。
东孚垃圾场填埋工人以蛔虫轻度感染为主,在城市从事种植的民工以钩虫轻度和重度感染为主。居住时间不到1年者感染率较高(24.41％)。
B.对岛外某驻军102名官兵及其家属粪检结果表明,钩虫为主要的肠道寄生虫感染,占感染者总数71.43％。
5个厦门市常年污水监测点,发现携带寄生虫卵多的污水分布在同安和中山医院的污水出口处,且以钩虫卵较多。高峰期在7月至8月,可能与当地主要农作物种植季节有相关性。
(5)和民族关系:在漳州市华安县调查汉、畲2个民族,表明:畲族的感染率高于汉族,2个民族人群钩虫感染率差异显著(X2=5.04,P＜0.05)。
(6)家庭聚集性特征:对369户二项分布齐性检验的G统计量显示:钩虫感染家庭聚集性分布差异显著(P＜0.01),建议防治注重以家庭为主体的服药。
访问415个居民,寄防知识平均知晓率较低(29.15％)。调查蔬菜被污染人体寄生虫卵、幼虫阳性率为14.29％,菜地钩虫、蛔虫和鞭虫总感染率28.57％,以农村较高。
3.厦门市儿童蛲虫感染现状:抽查7所幼儿园共625名儿童,感染率为23.20％,6岁组最低,5岁组最高,各年龄组(相差1周岁)之间无显著差异。男孩与女孩感染率分别为28.21％和18.21％,差异显著。外来民工子女蛲虫感染率远高于本地生源；环境蛲虫卵以儿童内裤污染率较高8.57％(6/70)。
此外,还报道了蛔虫和鞭虫感染率随年龄增长的趋势,10～15岁年龄组达到顶峰,分别为2.43％、0.93％。
调查了70份狗、猫粪便中的犬钩虫,其感染率分别为28.00％(14/50),5.00％(1/20),前者感染率较高,两者差异显著(X2=5.96,P＜0.05)。
同时对若干重要人体寄生虫病例做了个案记述、感染史推测与分析。
4.根据形态学研究,描述了圆线虫目(Strongylida)的四种线虫即美洲钩虫、十二指肠钩虫、犬钩虫和东方毛圆线虫及杆形线虫目(Rhabditida)粪类圆线虫的形态特征。此外,就蛔虫、鞭虫、蛲虫、肝吸虫虫卵也做了形态描述。
5.自行设计了配套使用的一大一小的培养皿,成功收集到大量钩蚴,其在相同的培养条件下获得的幼虫数量相当于“T”试管滤纸培养法的30～40倍,并且所获的虫体清洁,不受粪便污染,有利于钩虫的生物学研究。
6.首次应用线虫雾化分离器在分离土壤中的钩蚴技术方面进行了探讨,证明其分离效率随着时间的推移而逐步提高,且始终保持较高的成活率(60％),可用于土源性寄生虫流行病学大规模调查和实验寄生虫学研究。
7.用第5点方法获得大量钩蚴,首次在沙盘中进行对钩蚴的引诱移行试验。
①在沙盘含水率15~20％的范围内,大肠杆菌对美洲L3钩蚴的诱引效果比无菌水的好；同时,随着含水率的提高,大肠杆菌诱引到的钩蚴增加,而含无菌水的海绵条中钩蚴减少。
②在温度20-37℃的范围内,大肠杆菌对钩蚴的诱引效果比无菌水诱引的好；而随着温度的升高,大肠杆菌和无菌水诱引到的钩蚴出现不同程度的增加趋势,说明温度是影响钩蚴移行的重要因子。
③大肠杆菌、人体汗液皮屑比猪小肠内容物、无菌水对钩蚴具有较明显的诱引作用。
8.在2％的水琼脂平板上进行大肠杆菌对钩蚴的吸引试验,美洲钩虫、十二指肠钩虫、犬钩虫的钩蚴都有向平板中心菌块移动的趋势,三者以美洲钩虫L3钩蚴吸引力占有明显的优势。
9.分别克隆了十二指肠钩虫的ITS1-5.8S-ITS2和18S rDNA序列,上传到GeneBank中注册,登录号分别为:5.8S rRNA基因:EU344796、ITS1-5.8S-ITS2:EU344797、18S rRNA基因:EU344798,其中18S rDNA是新的序列。
根据ITS1和ITS2的序列,做了钩口属(Ancylostoma)的系统发育分析,进一步从分子水平证实了与形态学鉴定结果一致,即供试钩虫为十二指肠钩虫(A.duodenale)。利用18S rDNA序列,对圆线目(Strongylida)进行了系统发育分析,结果表明,圆线目有3个主要进化枝(clade),其中钩口亚目(Ancylostomatina)和圆线亚目(Strongylina)共享同一个进化枝(自引支持度88％)。RAPD分析结果表明,十二指肠钩虫(A.duodenale)具有丰富的种内遗传多样性。