Daintain/AIF-1(DT/AIF-1)是一个与炎症密切相关的蛋白质。前期研究发现DT/AIF-1在乳腺肿瘤组织中表达阳性,而在周围正常组织中为弱阳性或阴性。这提示DT/AIF-1与乳腺肿瘤的发生、发展过程密切相关。然而,DT/AIF-1影响乳腺癌进程的作用机理并不清楚。研究发现DT/AIF-1可以促进巨噬细胞的增殖、迁移以及 T淋巴细胞的分泌活动,表明它在巨噬细胞等炎性细胞的激活过程中发挥重要的作用。现在已经清楚,巨噬细胞在肿瘤的发生以及转移过程中扮演重要角色。由此可见,DT/AIF-1可以通过激活巨噬细胞来作用于肿瘤的进程。然而,DT/AIF-1是否还可以直接影响肿瘤细胞的行为呢?基于此,本实验在体外研究了DT/AIF-1对乳腺癌细胞MDA-MB-231生理活动(包括增殖和分泌活动)的影响,以期为阐明DT/AIF-1影响乳腺癌进程的分子机制提供帮助。　　首先,本实验检测了DT/AIF-1在正常乳腺细胞HBC100以及非转移性乳腺癌细胞 MCF-7和转移性乳腺癌细胞 MDA-MB-231中的表达。结果显示 DT/AIF-1在HBC100中的表达稍微低于它在MCF-7以及MDA-MB-231中的表达。　　其次,为了进一步检测了DT/AIF-1对MDA-MB-231增殖以及分泌活动的影响。构建了两个重组质粒:pcDNA-DT和pRNAT-DT,它们分别可以促进和抑制DT/AIF-1在受体细胞中的表达。通过将这两个质粒转入MDA-MB-231,分别获得了DT/AIF-1过表达和表达抑制的两种乳腺癌细胞。然后,我们观察了 DT/AIF-1表达改变对肿瘤细胞生长的影响。结果表明DT/AIF-1过表达MDA-MB-231的增殖速度明显快于野生型细胞,而DT/AIF-1表达抑制细胞的生长速度显著减慢。进一步,检测了DT/AIF-1对细胞周期的影响。结果发现DT/AIF-1表达被抑制以后,细胞从G0/G1期向S期以及G2/M期转变的速度明显慢于对照细胞,这说明DT/AIF-1表达抑制细胞的细胞周期延长了。随后,检测了转染pcDNA-DT和pRNAT-DT以及相应空载体pcDNA和 pRNAT的 MDA-MB-231中 G0/G1期细胞周期调控蛋白cyclin D1的表达。结果表明,DT/AIF-1过表达可以促进cyclin D1的表达,而DT/AIF-1表达抑制对cyclin D1表达的影响刚好相反。紧接着,检测了DT/AIF-1对调控cyclin D1表达的NF-κB转录活性的影响。结果显示DT/AIF-1过表达细胞中NF-κB的活性明显高于野生型细胞和DT/AIF-1表达抑制细胞。而且当用10％FBS刺激细胞0.5小时后,这种差异更加显著。　　再有,探索了DT/AIF-1对细胞分泌活动的影响。结果表明,培养过pcDNA-DT转染细胞的条件培养基中的细胞因子成分多于空质粒pcDNA转染对照细胞。而且与对照组条件培养基相比较,这种条件培养基可以促进野生型MDA-MB-231增殖。通过LC-MS-MS鉴定,发现条件培养基中含量增加的一个成分是14-3-3δ。经RT-PCR检测发现, pcDNA-DT转染细胞中14-3-3δ在mRNA水平的表达明显高于野生型细胞和DT/AIF-1表达抑制细胞。　　最后,观察了DT/AIF-1对MDA-MB-231在裸鼠皮下形成肿瘤的影响。结果显示,皮下接种10周以后,DT/AIF-1过表达细胞在所有8个被接种裸鼠皮下均形成肿瘤,而仅有50%接种空质粒转染细胞的裸鼠在皮下形成可见肿瘤。另外, DT/AIF-1过表达细胞所形成的肿瘤明显大于对照细胞。通过进一步检测肿瘤组织中反映细胞增殖状况的两个指标——cyclin D1和Ki67——的表达,结果显示,DT/AIF-1过表达肿瘤组织中cyclin D1和Ki67的表达明显多于空质粒转染对照组。　　上述研究结果表明:1,DT/AIF-1可以促进乳腺癌细胞MDA-MB-231增殖,这主要与它可以激活NF-κB/cyclin D1信号通路,从而促进细胞进行有丝分裂有关。2,DT/AIF-1可以增强MDA-MB-231的分泌活动,而且这种分泌活动的增强有利于肿瘤细胞的增殖。值得注意的是,DT/AIF-1可以促进14-3-3δ在MDA-MB-231中的表达与分泌。由于14-3-3δ是一个与细胞的增殖,迁移以及分泌活动密切相关的伴侣分子,因此,上述结果提示DT/AIF-1对肿瘤细胞增殖以及分泌活动的影响很可能与14-3-3δ有关。3,DT/AIF-1可以促进MDA-MB-231在裸鼠皮下形成肿瘤,表明DT/AIF-1是有利于肿瘤细胞在体内的生存以及增殖的。　　综上所述,DT/AIF-1在乳腺癌细胞MDA-MB-231的激活过程中发挥重要作用。