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目的：通过检测溃疡性结肠炎（Ulcerative colitis,UC）大鼠结肠标本中GFP及STAT6的表达，探讨骨髓间充质干细胞（Bone marrow mesenchymal stem cells，BMSCs）能否移植治疗UC以及复方苦参汤(Compound sophorae flavescentis decoction,CSFD)是否具有协同作用。
方法：1.体外培养扩增SD大鼠BMSCs，流式细胞术鉴定BMSCs，采用慢病毒载体介导的GFP技术（lentivirus-GFP)对BMSCs进行荧光蛋白（GFP）标记（Ad-GFP-BMSCs），SD大鼠被随机分为五组：空白组，模型组，干细胞组（Ad-GFP-BMSCs组），中药组，二联组（Ad-GFP-BMSCs加中药组）。2.2,4,6-三硝基苯磺酸（2,4,6-trinitrobenze nesulfonicacid，TNBS)诱导UC模型，腹腔注射Ad-GFP-BMSCs于干细胞组和二联组大鼠体内，中药组及二联组每天对大鼠进行中药悬液灌胃治疗，一周后收集结肠标本。3.对结肠标本进行组织学评分及病理学评估，采用免疫荧光及Western blotting检测结肠标本的GFP表达情况。4.用Western blotting检测各组结肠标本中的非磷酸化及磷酸化的信号转导及转录激活因子6(Signal transducerandactivator Of transcription6,STAT6)的表达情况。
结果：1.BMSCs具有贴壁生长特性，多为梭形、多角形，融合时多呈放射状或旋涡状，流式细胞术鉴定BMSCs阳性表达CD29、CD90，表达率分别为99.3％和99.1％；而阴性表达CD45、CD11b，表达率分别仅仅只有1.9％和1.7％。携带GFP慢病毒载体（lentivirus-GFP）成功标记BMSCs，转染后BMSCs能够稳定表达GFP。2.TNBS成功诱导UC，由TNBS诱导的UC模型大鼠，疾病活动指数(Diseaseactivity index,DAI)明显上升，病理学分析可见UC模型大鼠结肠黏膜腺体排列不规则，较大范围的上皮脱落，可见溃疡形成，黏膜层及黏膜下层可见大量炎症细胞浸润。3.腹腔注射一周，Ad-GFP-BMSCs组及二联组免疫荧光及Western blotting可检测到GFP表达，其余三组无GFP表达。Western blotting检测结果显示，经BMSCs移植治疗后，干细胞组及二联组STAT6及p-STAT6表达均有所下降，其中二联组下降更为明显。
结论：1.本实验采用贴壁生长法，成功地培养出大鼠BMSCs，采用流式细胞术鉴定所培养的第三代细胞，结果证实为BMSCs。2.经携带GFP慢病毒载体（lentivirus-GFP）转染BMSCs后，荧光显微镜下细胞稳定表达GFP,且随着培养时间的延长，生长状况良好，说明细胞生长基本不受慢病毒转染影响。Ad-GFP-BMSCs经培养移植后，荧光不减退，可以用于体内细胞示踪。3.Ad-GFP-BMSCs移植UC大鼠模型体内后，免疫荧光及Western blotting可检测到结肠标本中GFP表达，说明BMSCs能到达受损的结肠组织。4.经Ad-GFP-BMSCs移植的结肠标本中STAT6及p-STAT6表达较模型组均有所下降，说明BMSCs移植对大鼠溃疡性结肠炎有治疗作用。二联组（中药加Ad-GFP-BMSCs）STAT6及p-STAT6下降更为明显，表明中药对BMSCs移植治疗UC有协同治疗作用。
方法：1.体外培养扩增SD大鼠BMSCs，流式细胞术鉴定BMSCs，采用慢病毒载体介导的GFP技术（lentivirus-GFP)对BMSCs进行荧光蛋白（GFP）标记（Ad-GFP-BMSCs），SD大鼠被随机分为五组：空白组，模型组，干细胞组（Ad-GFP-BMSCs组），中药组，二联组（Ad-GFP-BMSCs加中药组）。2.2,4,6-三硝基苯磺酸（2,4,6-trinitrobenze nesulfonicacid，TNBS)诱导UC模型，腹腔注射Ad-GFP-BMSCs于干细胞组和二联组大鼠体内，中药组及二联组每天对大鼠进行中药悬液灌胃治疗，一周后收集结肠标本。3.对结肠标本进行组织学评分及病理学评估，采用免疫荧光及Western blotting检测结肠标本的GFP表达情况。4.用Western blotting检测各组结肠标本中的非磷酸化及磷酸化的信号转导及转录激活因子6(Signal transducerandactivator Of transcription6,STAT6)的表达情况。
结果：1.BMSCs具有贴壁生长特性，多为梭形、多角形，融合时多呈放射状或旋涡状，流式细胞术鉴定BMSCs阳性表达CD29、CD90，表达率分别为99.3％和99.1％；而阴性表达CD45、CD11b，表达率分别仅仅只有1.9％和1.7％。携带GFP慢病毒载体（lentivirus-GFP）成功标记BMSCs，转染后BMSCs能够稳定表达GFP。2.TNBS成功诱导UC，由TNBS诱导的UC模型大鼠，疾病活动指数(Diseaseactivity index,DAI)明显上升，病理学分析可见UC模型大鼠结肠黏膜腺体排列不规则，较大范围的上皮脱落，可见溃疡形成，黏膜层及黏膜下层可见大量炎症细胞浸润。3.腹腔注射一周，Ad-GFP-BMSCs组及二联组免疫荧光及Western blotting可检测到GFP表达，其余三组无GFP表达。Western blotting检测结果显示，经BMSCs移植治疗后，干细胞组及二联组STAT6及p-STAT6表达均有所下降，其中二联组下降更为明显。
结论：1.本实验采用贴壁生长法，成功地培养出大鼠BMSCs，采用流式细胞术鉴定所培养的第三代细胞，结果证实为BMSCs。2.经携带GFP慢病毒载体（lentivirus-GFP）转染BMSCs后，荧光显微镜下细胞稳定表达GFP,且随着培养时间的延长，生长状况良好，说明细胞生长基本不受慢病毒转染影响。Ad-GFP-BMSCs经培养移植后，荧光不减退，可以用于体内细胞示踪。3.Ad-GFP-BMSCs移植UC大鼠模型体内后，免疫荧光及Western blotting可检测到结肠标本中GFP表达，说明BMSCs能到达受损的结肠组织。4.经Ad-GFP-BMSCs移植的结肠标本中STAT6及p-STAT6表达较模型组均有所下降，说明BMSCs移植对大鼠溃疡性结肠炎有治疗作用。二联组（中药加Ad-GFP-BMSCs）STAT6及p-STAT6下降更为明显，表明中药对BMSCs移植治疗UC有协同治疗作用。