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从大肠杆菌菌株DH10Bac中提取Bacmid,与质粒pGEM-egfp△Ac74 DNA共转染Sf-9细胞,二者在Sf-9细胞内利用Ac-p74基因的侧翼序列进行同源重组,得到重组穿梭载体Bacmid-egfp。收集有绿色荧光的Sf-9细胞上清,进行五轮空斑纯化,并经PCR检测后,得到纯化的重组Bacmid-egfp,从第5轮空斑纯化的Sf-9细胞提取总DNA,电转化E.coli DH10B感受态细胞,在含Kan~r/X-gal/IPTG的LB固体平板上挑取兰色单菌落,即得到含重组Bacmid-egfp的菌株;再将从E.coli DH10Bac中提取的助手质粒pMon7124转化其中,在含Kan~r/Tet~r/X-gal/IPTG的LB固体平板上挑取兰色单菌落,得到了E.coli DH10Bac-egfp菌株,其Bacmid经改造后带有EGFP标记。 从E.coli DH10Bac-egfp提取Bacmid-egfp DNA,转染Sf-9细胞后5天,在荧光显微镜下可以观察到大部分细胞都发出绿色荧光,表明从E.coli来源的Bacmid-egfp DNA仍然保持着对Sf-9细胞的感染性;利用该菌株转座构建的重组穿梭载体Bac-egfp-polh DNA转染Sf-9细胞后,所有产生绿色荧光的细胞都有病毒包涵体的形成,而且所有形成包涵体的细胞都有绿色荧光;我室刘鑫博士利用Bacmid-egfp穿梭载体成功地表达了麻疹病毒受体SLAM,以绿色荧光作标记发现表达的SLAM蛋白定位在Sf-9细胞表面,与人类细胞中的自然定位相同。而且Sf-9细胞表面的SLAM可以介导麻疹病毒对非受纳昆虫细胞的感染。证明该系统维持了亲本Bac to Bac系统的特性和功能,但却增加了亲本Bacmid所不具有的绿色荧光筛选标记。 将多角体蛋白基因和绿色荧光蛋白基因的融合表达盒经Bac to Bac系统转