论文部分内容阅读
[目的]将化合物C18H17NO6制备成纳米脂质体,解决其不溶于水的问题,改变制剂类型。通过正交实验,得到脂质体最佳配比方案,摸索影响载药量的因素,调整制备方案。研究C18H17NO6纳米脂质体体外抗肿瘤作用的剂量效应关系,观察C18H17NO6纳米脂质体联合顺铂对人癌细胞株的体外联合作用形式及作用强度。通过人癌裸鼠移植瘤模型观察C18H17NO6纳米脂质体的体内抗肿瘤作用。采用流式细胞术,探讨C18H17NO6纳米脂质体对癌细胞凋亡的影响。[方法]1.采用薄膜分散-超声法制备纳米脂质体,通过正交实验确定主要影响脂质体载药量的因素为磷脂与胆固醇的量,调整纳米脂质体制备方案,220nm无菌滤头过滤控制粒径的方法,HPLC法测定纳米脂质体的载药量。2.采用体外抗癌实验,通过MTT法检测不同浓度C18H17NO6纳米脂质体对人结肠癌细胞株(HCT-116)、人肝癌细胞株(HepG2)、宣威肺癌细胞株(XWLC-05)、人乳腺癌细胞株(MCF-7)、非小细胞肺癌细胞株(A549)的体外抑制作用。3.采用体外联合顺铂实验,通过MTT法检测不同浓度的C18H17NO6纳米脂质体对人乳腺癌细胞株(MCF-7)、宣威肺癌细胞株(XWLC-05)的体外抑制增殖作用,并通过金氏公式计算得出C18H17NO6纳米脂质体与临床抗肿瘤药物的联合作用形式。4.采用人癌裸鼠移植瘤模型,通过测量裸鼠肿瘤的体积,计算肿瘤相对增殖率,观察C18H17NO6纳米脂质体体内抗肿瘤作用的有效性。实验结束后,精确称量体重和主要脏器重量,初步评价药物的安全性。5.采用流式细胞术,探索C18H17N06纳米脂质体是否诱导肿瘤细胞凋亡。[结果]1、化合物C18H17N06可以制备为纳米脂质体,大豆磷脂与胆固醇的量在5:1的条件下,HPLC法测定脂质体载药量为1.26mg/ml,粒径小于220nm。正交分析直接分析法得出大豆磷脂与胆固醇的量为主要影响因素。大豆磷脂与胆固醇固定比例用量越多,纳米脂质体载药量越大。2、C18H17NO6纳米脂质体体外实验具有体外抑制多种肿瘤细胞的作用,且对不同肿瘤细胞敏感性不同。在不同质量浓度化合物C18H17NO6纳米脂质体0.5μg/mL、1 μg/mL、2 μ g/mL、3 μ g/mL、4 μ g/mL 条件下,对人结肠癌细胞株(HCT-116)的抑制率分别为 5 1.28%、73.38%、90.09%、98.28%、99.95%,IC5。为0.86 μ g/mL。对人肝癌细胞株(HepG2)的抑制率分别为30.87%、32.18%、46.32%、78.34%、96.91%,IC5。为 1.86 μ g/mL。对宣威肺癌细胞株(XWLC-05)的抑制率分别为-2.49%、1.04%、27.78%、78.12%、85.59%,IC5。为 2.48 μ g/mL。对人乳腺癌细胞株(MCF-7)的抑制率分别为-9.85%、-2.63%、17.57%、46.38%、61.13%,IC5。为3.44 μ g/mL。非小细胞肺癌细胞株(A549)的抑制率分别为19.12%、23.54%、32.27%、39.67%、66.52%,IC5。为 3.17 μ g/mL。根据 IC5。值,说明C18H17N06纳米脂质体对HCT-116细胞株最为敏感,在最大剂量浓度4 μ g/mL时,其对肿瘤细胞的最大抑制率可达99.95%。且C18H17N06纳米脂质体体外抗肿瘤作用具有显著的剂量-效应关系,体外加样浓度越大,对肿瘤细胞的抑制作用随之越大。3、C18H17NO6纳米脂质体与顺铂联合对人宣威肺癌细胞株(XWLC-05)、人乳腺癌细胞株(MCF-7)体外抗肿瘤细胞研究中,当载药纳米脂质体浓度为0.5 μ g/mL、1 μ g/mL时,C18H17NO6纳米脂质体与顺铂联合对人宣威肺癌细胞株(XWLC-05)呈拮抗作用,Q值分别为0.72、0.78,载药纳米脂质体浓度为2 μ g/mL时,C18H17NO6纳米脂质体与顺铂联合对人宣威肺癌细胞株(XWLC-05)呈相加作用,Q值为0.93。C18H17NO6纳米脂质体与顺铂联合对人乳腺癌细胞株(MCF-7)体外抗肿瘤细胞研究表现为相加作用,纳米脂质体浓度为0.5 μ g/mL、1 μ g/mL、2 μ g/mL 时,Q 值分别为 0.97、1.09、0.90。4、C18H17NO6纳米脂质体对裸鼠体内移植结肠癌细胞有抑制增殖的作用,且存在明显的时间-效应关系,实验第4、8、12、16、20天,三组实验组肿瘤体积相对增殖率 ml(0.3 mg/ml)实验组分别为 91.72%、81.54%、78.73%、79.98%、66.57%。m2(0.6 mg/ml)实验组分别为 80.15%、69.52%、77.40%、70.05%、56.49%。m3(1.2 mg/ml)实验组分别为 76.65%、71.01%、70.94%、55.12%、50.98%。其肿瘤体积相对增殖率随着给药次数的增加而明显降低,与C18H17NO6纳米脂质体体外抑制结肠癌细胞的趋势相同。且给药浓度越高,肿瘤体积相对增殖率越低,存在剂量-效应关系。初步进行一般毒性实验过程中,随着给药次数的增加,实验组裸鼠体重与阴性对照组趋势相似,平均体重均稍有下滑,相反DDP阳性对照组实验期间裸鼠体重下降趋势较大,这与广谱抗癌药顺铂的毒副作用有关。实验结束解剖裸鼠发现实验组对肝脏有一定损伤,对其他脏器损害较小或几乎没有损害。5、通过流式细胞术,发现C18H17N06纳米脂质体有促进癌细胞凋亡的作用,进而可以抑制癌细胞增殖生长。[结论]1、化合物C18H17NO6可以成功制备为纳米脂质体,大豆磷脂与胆固醇的量在5:1的条件下,载药量为1.26 mg/mL,平均粒径小于220nm,可用于体内注射。大豆磷脂与胆固醇的量为主要影响纳米脂质体载药量的因素。2、C18H17NO6纳米脂质体有体外抗肿瘤作用,体外具有剂量-效应关系,随加样浓度增加,纳米脂质体对肿瘤抑制率越高。人结肠癌细胞株(HCT-116)为最敏感细胞株。3、C18H17NO6纳米脂质体与顺铂联合对人宣威肺癌细胞株(XWLC-05)、人乳腺癌细胞株(MCF-7)体外抗肿瘤细胞研究中结果显示为相加作用。4、C18H17N06纳米脂质体体内裸鼠实验有明显的抗肿瘤作用及剂量-效应和时间-效应关系。5、C18H17N06纳米脂质体能诱导人结肠癌细胞株(HCT-116)的凋亡产生。