严重急促呼吸系统综合征(SARS)是由一种新的冠状病毒引起的传染性呼吸道疾病，严重危害了人民群众的身体健康。据世界卫生组织统计，从2002年11月广东发生第一例SARS病例始，到2003年8月7日，全世界共有8442人患病，死亡916人，病死率是11％。 SARS病毒与其它RNA病毒一样，有复制易出错的倾向，因此在传染或传代过程中容易发生突变，这种机制有利于病毒逃脱宿主的免疫系统而生存下来。许多研究已表明不同的SARS病毒分离株的全基因组序列存在不同程度的变异，显然，这些变异的研究对SARS病毒疫苗的研制具有重要的指导意义。此外，对SARS病毒在传代过程中的遗传稳定性进行分析，也可以为SARS灭活疫苗的研制提供必要的参考。本研究采用PCR产物直接测序的方法，对两株用于SARS灭活疫苗研制的，在Vero细胞上多次传代的SARS病毒进行了全基因组序列的测定，通过比较分析发现该病毒在传代过程中具有高度遗传稳定性：其中检定参比株(Sinol株)2代和11代全基因组序列比较有四个碱基的变化，而候选疫苗株(Sino3株)3代与10代的基因组全序列仅有一个碱基的差异。SARS病毒在Vero细胞上传代的遗传稳定性表明通过细胞大量培养SARS病毒制作灭活疫苗是可行的。 此外，大量研究表明S蛋白可以诱导产生SARS-CoV中和抗体，也有报道称，仅S1蛋白或其受体结合区就可以诱导产生中和抗体。本实验根据酵母密码子的偏好性，用PCR的方法合成了S蛋白受体结合区处的碱基序列：S303和S318，并将S318分别克隆到原核表达载体pET30a和酵母表达载体pPIC9K中；同时也构建了S1蛋白的原核及真核表达载体和S303的酵母表达载体。S318、S1在大肠杆菌中都以包涵体的形式表达，其中，S318的表达量为100mg/L，明显高于S1的20mg/L。纯化后的重组蛋白能够很好地与SARS灭活全病毒免疫小鼠血清和SARS恢复期病人血清发生免疫反应，表明其具有抗原性。同时，通过梯度透析复性的方法，对纯化后的重组蛋白进行复性。并对复性后重组蛋白进行质谱分析，利用所得的肽质量指纹谱(PMF)与蛋向肽库或已知氨基酸序列的蛋白的理论肽质量指纹谱进行比较，表明纯化复性后的重组蛋白为目的蛋白，且纯度很高，基本不含杂蛋白。复性后的重组蛋白免疫昆明小白鼠，可以诱导小鼠产生特异性抗体，其抗血清能与重组蛋白发生特异性反应，与SARS冠状病毒(变异株)裂解液包被抗原呈阳性反应。本实验表明重组蛋向具有很好的抗原性，可以用于SARS的诊断和重组亚单位疫苗的研究。比较遗憾的是，在毕赤酵母中没有检测到S1、S303和S318的表达，尽管S303和S318的密码子已经根据酵母密码子作了优化，但意义不大，具体原因还在继续分析之中。