基于静电吸附作用固定生物分子的免疫传感器的研究

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本论文可分为两部分: 一.生物传感器中生物分子固定化方法的研究.生物传感器中生物活性物质的固定是改善传感器性能最关键的步骤之一,传统的固定方法如共价键合和包埋法等对固定在传感界面上的生物活性物质的活性影响较大,如采用静电吸附或非特异吸附来实现生物活性物质的固定,可以很大程度上解决上述问题,本文试利用壳聚糖,改性褐藻酸钠和纳米二氧化钛等几种不同性质的物质通过静电吸附或者非特异吸附来实现生物活性物质的固定。 1)研制了一种基于壳聚糖和溴化氰改性褐藻酸钠凝集作用的日本血吸虫安培免疫传感器。褐藻酸钠—抗体复合物通过静电吸附作用被凝集到含石墨—石蜡—壳聚糖组分的电极表面,然后与抗原和酶标抗原进行竞争反应,以邻氨基酚为电子媒介,通过测定酶催化下双氧水对其氧化的电流大小来间接测定抗原的浓度。响应电流与血吸虫抗原在0.64—40μg/mL之间呈准线性关系。线性回归方程为: 2)利用纳米二氧化钛颗粒与碳粉的协同作用,制备了一种高灵敏度的过氧化氢传感器。辣根过氧化物酶通过与纳米二氧化钛之间的静电力和碳粉的非特异吸附而固定在电极表面,以邻苯二酚为电子媒介,对过氧化氧进行了测定,HRP酶的响应电流在2.4×10-4--3×10-7mol/L的H2O2的浓度范围内呈线性关系,灵敏度为0.1101ALmol-1cm2,校正系数为0.993(n=13)。 二.酶联荧光免疫体系中底物的研究。酶联荧光免疫体系中的关键部分在于生物活性物质的固定和荧光底物的选择,本文试发展几种新的荧光底物用于酶联荧光免疫体系的检测。 3)将纳米TiO2颗粒用作固定抗体的载体,以辣根过氧化物酶标记C3补体(HRP-C3),HRP-C3与待测C3发生竞争性免疫反应,反应的HRP-C3可催化荧光底物3,3’,5,5’-四甲基联苯胺(TMB)转化为无荧光物质,由测得TMB+H2O2混合底物溶液的荧光降低的大小判断待测C3的浓度。荧光值与C3补体在6.5ng/mL到75ng/mL之间呈准线性关系,相关系数为0.973。 4)以聚苯乙烯(PS)制成史持体,通过疏水性非特异吸附将IgG固定在其表面,然后与GaIgG和酶标GaIgG进行竞争免疫反应,以双氧水和甲哌氯丙嗪混合溶液为荧光底液,通过测定395nm处荧光增强的多少来测定GaIgG的浓度,荧光响应与GaIgG浓度在2n留mL到60n留mL之间呈准线性关系。相关系数为0.981.
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