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流感是由流感病毒引起的急性呼吸道传染病。流感病毒分为甲、乙、丙三型,禽流感病毒属于甲型流感病毒。甲型流感病毒宿主广泛、毒力强、经常发生基因变异,对人类健康危害最大。甲型流感病毒根据其包膜糖蛋白血凝素和神经氨酸酶分为不同亚型,目前已发现16种HA和9种NA亚型。历史上在人类引起大流行的是H1,H2,H3亚型,但是,近年来不断有禽流感病毒感染人类的报道,主要是H5、H7、H9亚型,尤其是H5亚型禽流感,自从2003年开始爆发于亚洲以来,已经蔓延到亚洲、欧洲、非洲许多国家,截至2006年5月,已有208人确诊感染,其中115例死亡,死亡率大于50%,对人类健康构成极大威胁。 对流感的治疗没有特效药物,目前控制流感流行的方法只有接种疫苗。每年在流感流行季节前在流感的高危人群中进行预防接种是减轻流感危害的重要措施。疫苗接种不仅可以降低高危人群的发病率和死亡率,也可减轻症状,降低并发症的发生,降低继续传播的几率。疫苗保护效果的差异主要取决于制备疫苗的流感毒株的抗原性与实际流行株抗原性的匹配程度。 流感好发于每年11月至次年2月,属于“伏气温病”、“春温”范畴。春温为感受了冬令寒邪,潜伏体内,郁久化热,至春伏热外发,伏邪自发于气分或营分。流感大流行期间,患者主要症状有发热,咽喉痛、咳嗽、肌痛,全身乏力、头痛、寒战、汗出、神昏谵语等。发病急骤,病情凶险,甚至数日内死亡。这些特征性表现根据春温辨证,属于伏邪发于气分、营分证,其辨证可循春温热烁营阴证。叶天士云:“入营尤可透热转气”,营分证的治疗原则为清营泄热,透热转气,代表方为清营汤。 一、研究目的 1、根据温病学伏气温病理论,确立清气凉营法治疗流感,体内外实验证实清营汤的抗病毒作用。 2、清营汤抗流感作用机制的初步探讨。 3、流感病毒A/Fort Monmouth/1/47(H1N1)HA、NA基因克隆、变异序列分析,找出变异位点,分析与流感病毒相关亚型的同源性。 二、实验步骤 1、流感病毒A/Fort Monmouth/1/47(H1N1)鸡胚尿囊腔传代、鼠肺适应,血凝滴度测定。 2、清营汤体内外抗流感病毒实验。 3、清营汤对流感小鼠血清SOD、MDA变化的影响。 4、尿囊液中提取病毒RNA,RT-PCR扩增病毒HA、NA基因序列,克隆测序并分