论文部分内容阅读
现代生活中,犬不仅能够促进人类的身心健康与家庭和睦,提高生活质量,更重要的是犬在执行缉毒、侦缉、搜救等方面具有重要的贡献;伴随着犬辅助生殖技术与基因编辑技术的不断发展,犬作为人类疾病动物模型对一些疾病研究也具有重要意义,如乳腺癌、阿尔默海茨病、帕金森病等。利用犬的辅助生殖技术来改善甚至增强犬的机能和贡献力,成为犬研究的关键环节。但由于犬特殊的生殖生理特性,犬的发情周期与排卵时间同其他动物相比差异性较大,导致犬的辅助生殖技术至今不甚完善。因此,本论文以犬的生理特征变化为基础,应用外源性生殖激素对不同生殖状态的犬进行超数排卵,探讨犬早期胚胎的发育,进一步完善和提升犬的辅助生殖技术。实验一:探索不同生殖状态犬的超数排卵方案。采用健康、生殖器官结构功能正常、不同生殖状态的20只中华田园母犬作为实验动物,利用eCG、hCG和PGF2α这三种生殖激素对不同生殖阶段的中华田园母犬进行超数排卵。本实验分为5组,4个超排实验组,1个对照组,每组4只犬。I、II、III组均为1.52.5周岁犬,其中I组为乏情期犬每天连续肌注eCG 200 IU,共17天,间隔1天后肌注hCG 500 IU;II组为发情前期犬每天连续肌注eCG 200 IU,共11天,间隔1天后肌注hCG 500 IU;III组为发情间期犬实验前连续肌注PGF2α0.3 mg/次,4次/天,共3天,间隔30天后每天连续肌注eCG 200 IU,共19天,再间隔1天肌注hCG 500 IU;IV组为812月龄的青年犬每天连续肌注eCG 200 IU,共11天,间隔1天肌注hCG 500 IU;V组为1.52.5周岁的对照组,自然发情,不做任何处理。结果显示:实验组I、II、III均能成功诱导发情(100%),实验组IV成功诱导发情率为75%。实验组I平均排卵数为27.25±2.06枚,实验组II的平均排卵数为33.00±3.46枚,实验组III平均排卵数24.67±1.53枚,实验组IV平均排卵数为11.33±3.21枚,实验组I、II、III、IV均高于对照组平均排卵数10.33±1.53枚,且I、II、III组超数排卵后的排卵数相对于对照组差异极显著(P<0.01),IV组超数排卵效果较差,其取卵数与对照组自然发情排卵差异不显著(P>0.05)。实验跟踪犬的生殖生理特征指标,结果发现:在孕酮水平维持升高趋势,雌二醇水平处于升高的平台期时,母犬外阴柔软,不再肿胀但出现皱褶,外阴黏膜颜色呈弱粉甚至偏白,阴道上皮细胞涂片中角化细胞大约为90%,此时大量卵泡处于排卵前的成熟阶段。实验二:犬胚胎早期体外发育的初步研究。从发情正常并成功接受公犬交配的母犬作为实验材料。在母犬交配后的第4天,利用手术冲胚法获得2-4细胞胚胎,用4种不同培养基TCM199、M2、M16、SOFaa在38.5℃、5%CO2、100%湿度的培养箱下培养,结果显示:胚胎在TCM199、M2、M16培养基中不发育;在SOFaa培养基中,胚胎能正常发育桑椹胚阶段。为了探索早期胚胎发育状态,2-4细胞胚胎在SOFaa培养液中分别置于37.5℃、38℃、38.5℃、39℃、39.5℃培养箱内培养,结果显示早期胚胎在38.5℃时能够发育到桑椹胚的紧缩阶段。综上所述,利用外源性生殖激素马绒毛膜促性腺激素、人绒毛促性腺激素及前列腺素类似物联合犬的生殖生理特征分析,成功诱导不同生殖状态中华田园犬发情并促进排卵,且排卵效果比自然发情效果好。在培养条件为38.5℃、5%CO2、100%湿度环境下,利用SOFaa培养基能够用于胚胎的早期发育。