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神经干细胞(neuralstemcell, NSC)是一种具有分化潜能的细胞,它可以分化为神经元、少突胶质细胞和星形胶质细胞,并可以通过自我更新和分化来为脑组织提供各种类型的细胞。神经干细胞具有分化潜能和自我更新能力。正是由于它具有这样一些特性,使其成为当今神经疾病治疗的重要研究内容。它不仅可以作为一种替代手段用于脑肿瘤、退行性疾病和中枢神经损伤等疾病的治疗,还可以用于探索神经系统发育的分子机理。因此,建立稳定的神经干细胞体外培养体系,是神经系统各类研究得以进行的基础。miRNA是一类全新的、能够调节特定基因表达的小RNA。它由生物体的内源基因编码并且在多种物种中高度保守。miRNAs是生物体内源性的一种小分子RNA,它的表达具有明显的组织特异性和时序性,一般含20～24个寡核苷酸,本身不具有开放阅读框,不编码蛋白质。近年来,大量的miRNA从脑部和神经干细胞中提取出来,这提示在神经系统的发展以及恶性转化中,miRNA可能在其中扮演了某种角色。但是目前大部分的研究都集中miRNA对神经系统发育分化过程的调控上,很少有研究工作把重点放在探索miRNA对神经干细胞恶性转化的调节上。本实验拟对神经干细胞和神经母细胞瘤Neuro-2a细胞系中差异表达的部分miRNA进行初步的筛选,选择出表达差异比较大的miRNA。在此基础上,用细胞学的方法检测其与Neuro-2a细胞的恶性表现是否有关联,以期筛选到符合预期的miRNA,对其作用机制进行初步研究。研究目的：1.通过摸索建立稳定的神经干细胞体外培养体系；2.筛选出在神经干细胞和神经母细胞瘤Neuro-2a细胞中表达差异较明显的miRNA,并找到其相应的靶基因；3.用细胞学的方法证实所选miRNA与Neuro-2a细胞的关系；4.用荧光素酶报告系统证实该miRNA与其相应靶基因的直接相互作用；5.在Neuro-2a细胞和神经干细胞中验证相关miRNA调控的靶基因的表达差异。实验结果；1.成功的建立了神经干细胞体外培养的技术平台,原代取材、细胞体外增殖都己经较为成熟,重复性好；2.实时定量PCR结果显示,miR-193a-3p、miR-30b、miR-335在Neuro-2a细胞系中出现上调,且miR-193a-3p上调明显有十倍之多,而其余miRNA在Neuro-2a细胞系中出现不同水平的下调,且miR-124、miR-34a、miR-455-5p下调非常明显；3.在Neuro-2a细胞中转染miR-193a-3p的抑制物后相比于对照组其增殖能力受到了明显抑制,而其凋亡比率却明显增加；4.荧光素酶报告系统的结果显示,在HEK293细胞中上调miR-193a-3p表达后,可以显著抑制含有PTEN的3’UTR区的荧光素酶报告基因的表达活性；5.与神经干细胞相比,PTEN在Neuro-2a细胞中显著低表达。结论：1.在Neuro-2a细胞中,miR-193a-3p表达水平显著上调。抑制miR-193a-3p的表达后,Neuro-2a细胞的增殖能力在一定程度上受到抑制,而其凋亡能力被促进；2. miR-193a-3p与PTEN的3’UTR区直接发生作用,在Neuro-2a细胞中,miR-193a-3p可能通过直接调控使PTEN的表达下降,促进神经母细胞瘤的发生。