多粘菌素E是一种由多种不同成分组成的多肽类抗生素,其主要成分是多粘菌素E1和多粘菌素E2。多粘菌素E以其无活性的前体药物多粘菌素E甲磺酸钠给药,对大多数革兰氏阴性需氧杆菌引起的感染有较强的杀菌作用,抗菌谱主要为不动杆菌属、铜绿假单胞菌、克雷伯氏菌属、肠杆菌属、大肠杆菌和沙门氏菌属等。多粘菌素E因其肾毒性和神经毒性于20世纪70年代曾一度被氨基糖苷类等其他抗生素取代,但是近年来,由于耐药菌的增多以及新型抗耐药抗生素的缺乏,多粘菌素E又重新被应用于临床治疗危重病人的感染。它是治疗多重耐药(MDR)革兰氏阴性菌,特别是铜绿假单胞菌、鲍曼不动杆菌和肺炎克雷伯菌引起感染的最后防线。本研究的目的为建立测定人血浆中多粘菌素E含量的分析方法,并应用于多粘菌素E甲磺酸钠人体药代动力学研究,评价多粘菌素E在人体内的药代动力学过程,为多粘菌素E临床用药提供依据。一、血浆中多粘菌素E浓度LC-MS/MS测定方法的建立本研究建立了准确度、灵敏度高,可重现的LC-MS/MS方法,用于测定人血浆中多粘菌素E的浓度。该方法采用多粘菌素B1作为内标,使用蛋白沉淀的方法进行血浆样品的前处理,上清液稀释后经Agilent Polaris C18色谱柱梯度洗脱后(有机相为含0.5%甲酸乙腈溶液,水相为含0.5%甲酸水溶液,流速为0.65mL/min～2.4 mL/min)进行质谱分析。质谱仪为配备ESI离子源的三重四极杆串联质谱仪,采用正离子化方式,在多反应监测(MRM)模式下检测。多粘菌素E1,E2和多粘菌素B1(内标)用于定量分析的离子对分别为m/z 585.6→m/z 101.1,m/z 578.6→m/z 101.1和m/z 602.5→m/z 241.3。线性范围为多粘菌素E1 20.0～2000ng/mL,多粘菌素E215.0～1500ng/mL。按照FDA及CFDA的法规及指导原则,对血浆样品的分析方法进行了完整的方法学确认,分别对定量下限、线性、特异性、精密度、准确度、残留效应、基质效应、回收率及稳定性进行了考察,结果显示各指标均符合相关规定的要求。该分析方法适用于多粘菌素E药代动力学研究。二、多粘菌素E甲磺酸钠在健康中国受试者体内药代动力学研究本试验采用平行设计。36名受试者(男女各半)分成三组,每组6男6女,分别进行注射用多粘菌素E甲磺酸钠低剂量(1.0mg/kg,作为粘菌素活性,相当于30000 IU/kg)、中剂量(2.5 mg/kg,作为粘菌素活性,相当于75000 IU/kg)高剂量(4.0 mg/kg,作为粘菌素活性,相当于120000 IU/kg)的单次给药药代动力学试验。受试者单次静脉滴注多粘菌素E甲磺酸钠1.0mg/kg、2.5mg/kg、4.0mg/kg后多粘菌素E的Cmax分别为(1.1±0.2),(2.1±0.5),(4.2±0.8)μg/mL,Tmax分别为2.0,1.9,1.9h,t1/2分别为(3.8±0.3),(3.9±0.3),(3.9±0.4)h,AUC0-24 分别为(5.2±0.9),(11.9 ± 1.3),(24.1±1.9)μg·h/mL。静脉滴注多粘菌素E甲磺酸钠在1.0mg/kg～4.0mg/kg剂量范围内,三个剂量组的药动学特征基本一致,剂量不影响多粘菌素E在人体内的主要药动学特征,多粘菌素E在健康受试者体内呈线性药动学特征。本试验建立了准确,可重现的LC-MS/MS方法来测定人血浆中多粘菌素E的含量,方法高特异性和灵敏度,准确性、精密度高,且稳定可靠,符合生物分析验证相关规定,可用于大量人血浆样品中多粘菌素E的分析。在1.0mg/kg～4.0mg/kg剂量范围内,剂量不影响多粘菌素E在人体内的主要药动学特征,且多粘菌素E在中国健康受试者体内具有线性药动学特征。