《兽药质量标准》（2017版）将恩诺沙星可溶性粉中含量测定方法规定为紫外-可见分光光度计法,但紫外法不能区分与恩诺沙星具有相同或相近吸收波长,专属性相对较差;美国药典和欧盟药典都将高效液相色谱法作为恩诺沙星相关制剂中恩诺沙星含量测定的标准方法。我国农业部2172、2270、2440、2455号公告将磷酸替米考星可溶性粉中替米考星含量测定方法规定为高效液相色谱法,但各公告中的色谱分析条件并不完全一致,在对样品进行相关检测时,各公告色谱分析条件不一致,样品的分离度和规定的杂质限度没有在合理的限度范围,对兽药质量监测不能进行有效控制。现行《兽药质量标准》（2017版）和《中国兽药典》未对其作出规定。为了论证和建立恩诺沙星可溶性粉中恩诺沙星含量测定的高效液相色谱法和磷酸替米考星可溶性粉中替米考星的测定方法。本研究对恩诺沙星和替米考星的高效液相色谱测定方法进行系统适用性研究,并与现有标准或公告中的检测方法进行比较,筛选确定色谱分析条件,为恩诺沙星可溶性粉、磷酸替米考星可溶性粉国家兽药检测标准的完善提供参考。本研究采用高效液相色谱测定方法对恩诺沙星可溶性粉中的恩诺沙星含量进行测定和系统适用性研究,以0.025 mol·L-1的磷酸溶液:乙腈（83:17）为流动相,检测波长为278 nm,流速为1.0 mL·min-1,色谱柱为C18。结果表明,本研究测得的恩诺沙星平均回收率为99.78%,最低检出限为0.06μg·mL-1,理论塔板数11822,0.01～0.1 mg·mL-1范围内线性关系与重复性良好,方法精密度和溶液稳定性好。与2017版《兽药质量标准》中恩诺沙星可溶性粉中的恩诺沙星含量的紫外分光光度法相比,HPLC法的系统适用性更好。本研究对磷酸替米考星可溶性粉进行高效液相色谱法验证和系统适用性研究,以水:乙腈:磷酸二丁胺溶液:四氢呋喃（810:110:25:55）为含量测定流动相;结果表明,本研究中替米考星平均回收率为97.96%,色谱保留时间反式峰保留时间为7.140min,顺式峰保留时间为8.232 min,0.1～1 mg·mL-1范围线性关系与重复性良好,最低检出限为0.07μg·mL-1。理论塔板数可达5457,方法精密度好,分离度高。与农业部2172号、2455号、2440号、2270号公告对比,本研究建立的HPLC检测方法系统适用性更好。