【摘 要】
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目的:构建一个能在MC3T3-E1细胞中稳定表达,并具有生物学活性的血管内皮生长因子165和血管内皮生长因子121基因表达载体。 方法:采用RT-PCR技术从HL-60细胞中扩增人VEGF165和
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目的:构建一个能在MC3T3-E1细胞中稳定表达,并具有生物学活性的血管内皮生长因子165和血管内皮生长因子121基因表达载体。 方法:采用RT-PCR技术从HL-60细胞中扩增人VEGF165和VEGF121基因,将获得的基因定向插入pcDNA3.1(+)真核表达质粒中,测序正确后用脂质体将表达质粒转染入MC3T3-E1细胞,经G418加压有限稀释法进行筛选。采用ELISA法、Western blot法及免疫荧光法检测VEGF蛋白表达,并用MTT法检测表达的蛋白对血管内皮细胞株(HUECV304)的增殖活性影响。 结果:通过基因测序表明获得的VEGF165和VEGF121与GeneBank登录的序列一致,构建的质粒分别为VEGF165/pcDNA3.1(+)质粒和VEGF121/pcDNA3.1(+)质粒,ELISA及Western blot检测结果均表明VEGF165和VEGF121基因转染MC3T3-E1后能在细胞中稳定表达,表达产物能明显促进HUECV304细胞生长。
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