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马传染性贫血病毒(Equine infectious anemia virus,EIAV)是反转录病毒科慢病毒属成员之一,可以引起马属动物的一种急性烈性传染病,以贫血、持续感染、反复发热为特征,终生持续感染,是马属动物最重要的传染病之一。反转录病毒前病毒基因组长末端重复序列(LTR)对病毒复制有重要的调控作用,影响到病毒的复制动力学、细胞嗜性、致病力等方面。 本研究利用PCR方法分四个片段扩增了从自然感染马分离的马传染性贫血病毒(简称马传贫)的前病毒DNA,将PCR产物克隆于pMD18-T载体,得到四个重组质粒P2.8、P2.4、P2.6、P1.2。经PCR、酶切鉴定后进行序列测定,分析、拼接得到马传染性贫血病毒野外分离株前病毒的全基因组序列,其基因组全长8268bp。通过DNAStar分析,此分离株与马传贫病毒L株(L-EIAV)、马传贫驴强毒株(DA-EIAV)、马传贫驴白细胞弱毒疫苗株(DLA-EIAV)的序列同源性分别为86.0%、85.8%和85.2%。 通过对EIAV分离株WH17的LTR与L株、DA和DLA株的LTR序列进行比较,发现其在在U3-R结合处多一个E-box基序,推测该基序的变化可能会起到促进转录作用,为此将EIAV强毒株(DLA-25)、驴白细胞弱毒株(DLA-118)、EIAV分离株WH17以及U3-R结合处的E-box基序点突变的LTR分别克隆到pCAT3-basic质粒中的报告基因氯霉素乙酰转移酶(CAT)的上游,获得一系列受不同LTR控制的CAT表达质粒。分别将含有不同来源LTR的CAT表达质粒转染驴胎皮肤细胞(FDD)、驴白细胞及接种EIAV弱毒的FDD及驴白细胞,结果显示:在驴白细胞Tat蛋白可以特异性地增强EIAV-DLALTR的启动子活性,分离株WH17LTR的U3-R结合处的E-box基序对Tat的反式激活作用并无明显影响,而在驴胎皮肤细胞中,LTR启动活性也没有检测到。结果提示:EIAV分离株WH17的LTR U3-R结合处的E-box基序没有起到促进转录的作用,LTR是病毒嗜性影响的因素之一。