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2015年中国癌症统计数据显示,我国约有429.2万人新确诊为侵袭性癌症,相当于每天都有1.2万人被确诊,癌症严重威胁着现代人的生存和健康。20世纪末,基于放、化疗等传统治疗方法功效有限,针对癌症标志分子制备单克隆抗体药物的靶向治疗发展迅猛。自首个用于癌症治疗的单抗药物美罗华问世至今,大批单抗药物用于临床并取得了良好的治疗效果。影响单抗药物治疗效果的重要因素就是抗原蛋白的选择。SHON是近年来报道的在乳腺癌、肺癌、前列腺癌等多种癌症中发挥促癌功能的新型蛋白分子,与癌症的不良预后有着密切的联系。我们之前的研究发现,SHON可以促进乳腺癌细胞的EMT进程,帮助细胞侵袭和迁移,且通过参与TGF-β信号通路发挥促癌功能。因此,SHON有望成为多种癌症,尤其是乳腺癌诊断和治疗的新型靶标。本课题中,我们以亲和纯化的SHON蛋白作为抗原,制备并保存了多株分泌特异性识别SHON单克隆抗体的杂交瘤细胞株,并利用ELISA、MTT、迁移实验、Western blotting等实验对细胞株进行了多轮筛选,筛选到的5#抗体不但能与胞内表达和体外纯化的SHON蛋白均可特异性结合,且能够在一定程度上抑制SHON促癌功能的发挥。我们使用5′RACE试剂盒克隆得到了5#抗体可变区的完整序列,其中重链可变区VH 415 bp,轻链可变区VL 396 bp,并通过PCR方法进一步得到了抗体的完整序列,重链全长1425bp,轻链720 bp。将抗体基因与真核表达载体相连,转染导入CHO细胞中,经分泌表达验证证实产生的抗体具有很好的特异性。进而利用SOE-PCR技术构建单链抗体片段,使用亲水性linker序列将抗体的VH和VL以VL-linker-VH顺序连接,成功构建带有his标签的单链抗体原核表达载体。利用his标签亲和纯化得到大量his-scFv-SHON单链抗体,经ELISA等实验验证仍然具有抗原结合能力。此项工作为下一步开发以SHON为靶标的乳腺癌检测试剂盒和乳腺癌治疗的药物奠定了基础。