平欧杂种榛微型扦插技术及其愈伤组织诱导的初步研究

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榛子作为世界四大坚果之一,风味独特、营养丰富、经济价值高。平欧杂种榛子同时具备了国内平榛抗寒性强、萌蘖性强的特点,以及欧洲榛子果仁大、产量高的优点,因而被广泛推广。目前榛子主要采用扦插,压条等方式繁殖,由于其繁殖系数低,逐渐不能满足市场对榛子苗的需求。组织培养是一种高效率、低成本的良种繁育技术。本实验以杂种榛(84-226、84-349、84-69)为材料,对组培苗的继代培养和生根培养做了进一步的细化研究和优化处理,提出瓶外生根方式;对榛子茎段、叶片、子叶的愈伤组织诱导及分化做了初步研究,为榛子组培苗再生体系的建立奠定了基础。主要结果如下:(1)以改良NRM培养基作为杂种榛84-226继代培养的基本培养基,选择6-BA2.5mg·L-1和IBAO.01mg·L-1作为继代培养的激素组合,隔代降低其浓度至6-BA2.0mg·L-1和IBAO.005mg·L-1有利于促进榛子茎段的增殖。(2)TDZ适宜浓度范围0.001mg·L-1-0.01mg·L-1,且以0.005mg·L-1效果为最好。GA3有促进芽苗伸长的作用,但GA3对榛子茎段的增殖没有明显作用,本实验以浓度0.1mg·L-1为最优,当浓度达到0.3mg·L-1时,对芽苗生长有抑制作用。多胺对茎段的增殖显著高于GA3,但两者同时添加,增殖效果不及单独添加多胺。(3)随着继代代数的增加,IBA和6-BA的持续使用会引起芽苗体内IAA的增加,6-BA还会促进茎段根部形成愈伤组织以及丛生芽的出现,引起芽苗体内ABA的变化。GA和ZR整体变化较小,含量较低,对茎段增殖不明显。(4)NAA的生根效果好于IBA,且同时添加两者与单独添加NAA的效果无明显差异,出于生产考虑,以1/2DKW+NAA0.2mg·L-1为最佳瓶内生根处理。瓶外生根具有生根率高,育苗周期短,节约生产成本等优势,但其炼苗移栽配套管理方案还不完善。(5)随着月份的不同,瓶内生根组培苗内源激素和PPO、POD酶活性所呈现出的变化与其温室移栽生长状况的调查表现出一致性。(6)以NRM+2,4-D1.0mg·L-1+IBA0.5mg·L-1为榛子茎段、叶片愈伤组织诱导的最佳培养基,添加PVP的抗氧化作用较VC、AC好。愈伤组织诱导阶段,激素组合诱导效力为:生长素与生长素组合>细胞分裂素与细胞分裂素组合>生长素与细胞分裂素组合。(7)以MS+2,4-D4.0mg·L-1+6-BA0.5mg·L-1+脯氨酸500mg·L-1为榛子子叶愈伤组织诱导的最佳培养基,在与2,4-D组合的激素中,各愈伤组织的诱导效力为:6-BA>TDZ>NAA>KT。(8)体视镜观察愈伤组织诱导和分化的形态建成;以胚后发育为基本路线,通过电镜扫描观察其发育形态建成。
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