论文部分内容阅读
目的:分析耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌的耐药趋势及可能存在的耐药机制。方法:收集山西医学科学院山西白求恩医院(原名山西大医院)2018年1月至2019年1月期间临床分离的835株肺炎克雷伯菌,其中41株对碳青霉烯类抗菌药物耐药,将其纳入研究对象。采用MALDI-TOF MS联合Vitek-2 Compact 60全自动微生物分析系统进行鉴定,全自动微生物分析系统(Vitek-2 Compact 60)进行药敏分析,纸片扩散法(K-B法)进行补充药物敏感性试验。mCIM及eCIM试验进行碳青霉烯酶表型的筛选。PCR法检测耐药菌株可能存在的碳青霉烯酶耐药基因(如:bla KPC、bla GES、bla IMP、bla VIM、bla NDM和bla OXA-48等)及外膜孔道蛋白基因(Ompk35及Ompk 36),同时对于阳性扩增产物进行基因测序,使用RT-PCR检测外膜蛋白的存在及表达情况。结果:1.从医院共分离到835株肺炎克雷伯菌,其中41株(4.91%)被鉴定为CRKP。分离菌株来自的患者主要集中在21-80岁之间,其中以41-50岁之间的分离率最高,为24.39%(10/41);从ICU标本中分离出24.39%(10/41);从痰中分离出31.71%(31/41),尿液19.51%(8/41),血液19.51%(8/41)。2.从835株肺炎克雷伯菌中筛选出41株耐药菌株,行药敏仪结果显示对亚胺培南和厄他培南的耐药率分别为90.24%(37/41),100.00%(41/41);头孢唑林,头孢西丁和头孢曲松的耐药率均为100.00%;氨曲南的耐药率为97.56%(40/41);环丙沙星和左氧氟沙星的耐药率达90%以上。而对阿米卡星,庆大霉素和妥布霉素的耐药率相对较低,分别为56.10%(23/41),73.17%(30/41),73.17%(30/41)。3.对纳入研究对象的41株CRKP,行改良碳青霉烯灭活实验(mCIM)和EDTA-改良碳青霉烯灭活实验(eCIM)表型实验,结果显示31株(75.61%)菌株表现为丝氨酸酶,有3株(7.32%)为金属酶,7株(17.07%)显示为阴性;行分子学检测,检出的碳青霉烯酶耐药基因中有39株(95.12%)为bla KPC型,1株(2.44%)bla NDM型,1株(2.44%)同时具有以上bla KPC和bla NDM型基因型;外膜孔道蛋白仅有1株(2.44%)菌株缺失Ompk 36基因,余均存在Ompk 35及Ompk 36。进一步分析Ompk 35中41中只有9株(21.95%)表达下调,而Ompk 36中40株有38株(95.00%)表达下调。结论:1.耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌在山西白求恩医院的分离率较高,主要集中在重症医学科,此类细菌呈现出多重耐药的现象,耐药趋势的发展日趋严重,加强重点科室的感染控制,对于控制院内耐药菌株传播至关重要。2.临床分离到的耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌的耐药机制主要为产bla KPC酶合并Ompk 36外膜孔道蛋白表达量下降。