养殖银鲳美人鱼发光杆菌(美人鱼亚种)的分离鉴定及病原生物学的研究

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近几年,在浙江省宁波市养殖银鲳暴发了一种体表出血症状的细菌性疾病,不仅造成了重大的经济损失,并且严重阻碍了银鲳养殖业的发展。本研究针对美人鱼发光杆菌(美人鱼亚种),从病原菌的分离鉴定、致病性、组织病理学、细胞毒性和喹诺酮耐药机制等方面开展了系统的研究,探究美人鱼弧菌病的致病机理和耐药机制,为在银鲳大规模养殖中对预防和控制美人鱼弧菌病提供理论依据和数据基础。  从自然发病银鲳的肝、肾、脾等组织器官和体表溃疡处分离获得共55株菌株,选用一株溶血性较强的菌株69TBY1,人工感染试验证实该菌株为造成银鲳出血溃疡症状的病原菌。通过形态学观察和运动性实验,该菌革兰氏阴性,杆状,具有运动性。生理生化试验结合多序列分子测序分析鉴定病原菌为美人鱼发光杆菌(美人鱼亚种)(Photobacterium damselaesubsp.damselae)。对自然发病的银鲳进行病理学观察结果显示,肝、肾和脾是感染损伤的主要靶器官,细胞出现空泡化,炎性细胞浸润。荧光定量PCR结果显示,美人鱼亚种能够诱导YCK细胞的IL-1β、IL-8、TNFα、IL-6的表达,细胞毒性实验表明美人鱼亚种对YCK细胞的毒性较强,强于鰤鱼诺卡氏菌和杀香鱼假单胞菌。  测定环丙沙星、恩诺沙星和加替沙星等6种喹诺酮药物对病原菌的最小抑菌浓度(MIC),结果表明70株美人鱼亚种分离株的耐药率为5.71%-30%。通过扩增分离株的喹诺酮耐药基因(PMQR)和喹诺酮耐药决定区(QRDR)的序列比对发现,17株菌发生了gyrA(S83I)和parC(S80Y或S80F)的氨基酸双突变,qnrS、qnrB和aac(6’)-Ib-cr阳性数量分别为45株、1株和2株,其中两株同时携带两种耐药基因。
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