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目的：采用酶消化结合组织块培养法对山羊颞下颌(temporomandibular joint, TMJ)关节盘细胞进行体外培养和扩增,探索TMJ关节盘细胞体外培养及扩增的新方法。对山羊关节盘细胞进行体外琼脂糖凝胶三维培养,探讨动态压力和静态压力对凝胶组织细胞外基质分泌的影响。方法：1.在无菌条件下,切取一月龄山羊TMJ关节盘,剪至1.0 mm3的碎块,用0.25%胰酶、0.1%Ⅰ型胶原酶消化关节盘组织块,将消化好的组织块置入6孔板中培养。在倒置相差显微镜下连续观察细形态变化及贴壁率,甲苯胺蓝染色、Ⅰ型胶原免疫组化染色进行细胞鉴定,测定其生长曲线。2.将关节盘细胞培养至第2代时,转入琼脂糖凝胶中进行三维培养。仿照Shram系统构建体外立体培养的细胞动态压力加载模型。培养三天后将组织块随机分为三组：一组为动态加力组,即参照Shram等压力加载条件给予关节盘细胞凝胶组织0.2Mpa,频率0.1Hz的周期性压力；另一组为静态加力组,即关节盘细胞凝胶组织在0.2MPa静态压力作用下培养；对照组凝胶组织在常规条件下静态培养。加力完成后对琼脂糖凝胶内的关节盘细胞进行组织学染色和免疫组化染色,Ⅰ型胶原免疫组化染色结果使用图像分析系统做半定量分析。结果：1.原代培养的关节盘纤维软骨细胞4天可观察到贴壁细胞,7天贴壁细胞逐渐增多,第10天时细胞彼此相连,铺满平底,细胞以梭形为主,部分为多角形。传代后12小时贴壁率达90%,大部分为多角形,4-5天即可长满瓶底。甲苯胺蓝染色可见异染颗粒,Ⅰ型胶原免疫组化染色胞浆内可见棕黄色颗粒。2.在琼脂糖凝胶中培养的关节盘细胞能够维持其表型,能够正常合成细胞外基质。受0.2MPa,频率0.1Hz的周期性压力和0.2 MPa的静态压力刺激后,GAG和Ⅰ型胶原的表达均增加,且两者无显著性差异。结论：1.酶消化结合组织块培养法培养的山羊TMJ关节盘细胞具有较强的增殖能力,可作为TMJ关节盘组织工程中获取大量原代细胞的实用方法。2.周期性动态压力和间断静态压力都对关节盘细胞的细胞外基质合成具有促进作用,力学刺激同细胞外基质的分泌密切相关。在本实验条件下,两种压力模式产生的结果无显著性差异。