黄蜀葵花为锦葵科秋葵属植物黄蜀葵的干燥花,最先记录在《嘉佑本草》,分布广泛、资源丰富。《本草纲目》记载：其花气味甘、寒、滑、无毒,主治小便淋及催生,治诸恶疮脓水久不瘥者,作末敷之即愈,为疮家要药,消疽肿,浸油涂汤火伤等。现代研究证实黄蜀葵花提取物黄酮类成分不仅对疮疡有明显的治疗作用,对缺血导致心、脑、组织等损伤也具有明显的保护作用。本论文通过黄蜀葵花总黄酮在体外对内皮祖细胞抑制凋亡作用及对整体水平缺血性损伤的保护作用进行系统的探讨,研究内容分为以下几个部分：第一部分：综述当组织因各种原因导致的缺血发生后,组织的无氧代谢替换了有氧代谢,产生大量的糖酵解产物,导致组织水肿、炎症浸润及组织纤维坏死,组织损伤发生。对于缺血性损伤疾病的发病机制,目前公认的作用机制涉及能量代谢、钙超载、氧自由基、炎症细胞活化和各种促炎性细胞因子释放等因素,但其发病的具体分子机制尚未完全阐明,抑制组织损伤的药物也正处于研究阶段,目前临床尚无针对发生缺血后抑制组织损伤的保护、治疗性药物。各种治疗方向最终均作用于内皮细胞,促进内皮细胞向血管上皮细胞转化,促进血管新生达到组织修复、器官功能恢复的最终目的。传统医学在治疗缺血性疾病方面历史悠久,效果显著。其中黄蜀葵花在难治性疮疡治疗中体现出良好疗效,现代医学研究已经证实一定剂量的黄蜀葵花总黄酮对内皮细胞的迁移和分化具有明显的促进作用。内皮细胞来源于内皮祖细胞,而内皮祖细胞在体内数量极少,提高内皮祖细胞在缺血缺氧状态下抗氧化、抑制凋亡及抑制炎症能力并促进其转化为成熟的内皮细胞也是治疗缺血性疾病的关键。黄蜀葵花总黄酮作为传统中药的提取物,具有多组份优势,在复杂的缺血性损伤中起到保护并治疗的多靶点作用值得探讨。第二部分：实验研究通过黄蜀葵花总黄酮干预后肢缺血大鼠动物模型,观察TFA对炎症的抑制作用。经过后肢缺血大鼠实验模型的构建,给予黄蜀葵花总黄酮干预四周后处死大鼠,通过流式细胞技术检测血液中调节性T细胞亚群在模型及给药前后的变化水平,确定黄蜀葵花总黄酮具有抑制炎症,促进损伤部位愈合的作用；RT-PCR进一步验证了损伤部位肿瘤坏死因子α的表达水平,黄蜀葵花总黄酮可以显著抑制肿瘤坏死因子α的基因表达水平,抑制炎症反应在损伤部位的级联反应,通过促血管生成进而达到对缺血性损伤的保护。该部分的研究结果与后续药效学数据一致,也从另一个角度验证了黄蜀葵花总黄酮对缺血组织的保护作用,同时首次证实了黄蜀葵花总黄酮具有调控调节性T细胞细胞亚群的作用。通过黄蜀葵花总黄酮干预不同状态下的内皮祖细胞,观察TFA的抗凋亡作用。在体外条件下进行药理学实验研究,确定黄蜀葵花总黄酮在体外条件下可以保护内皮祖细胞的免受ROS引起的氧化损伤,对内皮祖细胞的增殖分化具有保护作用。内皮祖细胞经过H202处理后,发生明显的细胞凋亡,但是经过黄蜀葵花总黄酮的药物干预后,RT-qPCR检测发现凋亡相关基因Bak, caspase-3, caspase-9基因表达量明显降低,显示出黄蜀葵花总黄酮具有明显的抗凋亡作用。由此推测在整体水平,黄蜀葵花总黄酮具有相同的作用效果,可以保护缺血损伤部位内皮祖细胞的凋亡,进而发挥对缺血组织的保护作用。通过后肢缺血实验大鼠模型的构建,给药TFA治疗四周后处死大鼠,通过分子生物学实验进一步验证黄蜀葵花总黄酮的干预效果。黄蜀葵花总黄酮可以明显改善缺血大鼠后肢的炎症损伤水平,实验发现大鼠血清中的总自由基水平明显降低,caspase-3磷酸化水平降低,凋亡抑制蛋白Bcl-2的蛋白表达量明显升高,证实了黄蜀葵花总黄酮的对后肢缺血组织的保护作用。通过黄蜀葵花总黄酮干预心肌缺血再灌注损伤动物模型,观察TFA的心肌缺血再灌注损伤保护作用。实验发现黄蜀葵花总黄酮能显著改善心脏缺血再灌注损伤,显著改善心脏缺血再灌注氧化应激水平,抑制心脏缺血再灌注炎症水平,可以显著抑制心脏缺血再灌注状态下的炎症小体的激活。本课题研究表明：1、黄蜀葵花总黄酮在整体水平也可以降低损伤组织的炎症水平,下调肿瘤坏死因子α的表达,可以提高调节性T细胞亚群的比例来发挥抑制炎症,保护受损组织的作用。2、黄蜀葵花总黄酮在体外可以保护内皮祖细胞免受氧化应激导致的凋亡。3、黄蜀葵花总黄酮在整体水平可以有效的保护后肢缺血大鼠的损伤水平,促进血管新生,并抑制损伤部位的细胞凋亡。4、黄蜀葵花总黄酮在心肌缺血再灌注模型中可以降低再灌注部位的氧化应激水平,抑制缺血再灌注状态下的炎症小体NLRP3的激活进而发挥保护作用。