论文部分内容阅读
目的：观察重组人血管内皮抑制素(rh-endostatin,商品名：恩度,endostar)导致荷瘤动物循环血管内皮细胞(circulating endothelial cells、CECs)、肿瘤血管形态及血管生成相关因子的变化,阐明反应“血管正常化”时间窗的标志物,比较在此时间窗内及外实施化疗的抗肿瘤效应、探索抗血管生成联合化疗的最佳用药时间与顺序。方法：单药实验随机分为对照组(生理盐水200u1/d,第1-14天)、恩度组(恩度400ug/d,第1～14天)和顺铂组(顺铂4mg/kg/d,第1-5天)。联合用药实验随机分为对照组(生理盐水200ul/d,第1～14天)、同时用药组(恩度400ug/d,第1～14天；顺铂4mg/kg/d,第1～5天)、先恩度组(恩度400ug/d,第1～14天；顺铂4mg/kg/d,第5～9天)和先顺铂组(顺铂4mg/kg/d,第1～5天；恩度400ug/d,第6-19天)。动态测量移植瘤体积,流式细胞术动态监测CECs变化,激光共聚焦显微镜观察微血管形态变化、Image Pro Plus6.0软件统计血管渗漏面积、免疫组化方法检测治疗后EMMPRIN、VEGF、MMP2、MMP9、T1MP-1、TIMP-2、 HIF-1α表达及微血管密度(MVD)、胶原覆盖率的变化。结果：1.动物实验结果：单药恩度组(182.408mm3±46.379mm3)和单药顺铂组(234.774mm3±59.588mm3)治疗前后肿瘤体积的差值均低于对照组。先恩度组对肿瘤生长抑制作用较其他联合组更明显。各组小鼠体重变化无明显差异(P>0.05)。2.流式细胞术检测外周血CECs结果：与对照组比较,单药恩度组aCECs用药第7天升高(P=0.003),第10天下降(P=0.026)；凋亡CECs第10天升高(P=0.033)。先恩度组和先顺铂组aCECs均较对照组降低。各联合组凋亡CECs数量均较对照组升高。3.微血管形态变化结果：恩度治疗第7天和第10天血管分枝较少、血管变直、血管密度下降、血管壁渗透性降低。4.MVD及血管竹胶原覆盖率的结果比较：恩度给药第7天和第10天MVD降低、胶原覆盖率增加。各联合治疗组MVD均降低、微血管胶原覆盖率均增加。5.免疫组化染色结果：恩度给药第7天HIF-1α表达降低。EMMPRIN、VEGF、MMP-2和MMP-9的表达均于第4天明显降低。TIMP-1和TIMP-2的表达于给药第4天和第7天升高。先恩度组及先顺铂组可降低HIF-1α表达。各联合治疗组均可下调EMMPRIN、VEGF、MMP-2和MMP-9的表达,上调TIMP-2的表达。6.各指标间的相关性分析：HIF-1α, EMMPRIN, VEGF, MMPs, MVD之间存在正相关关系,HIF-1α与肿瘤体积呈正相关关系,VEGF, MMP-9及HIF-1α均与TIMP-1和TIMP-2呈负相关关系,肿瘤血管胶原覆盖率与MVD, VEGF, HIF-1α, MMP-2及MMP-9呈负相关关系,与TIMP-1及TIMP-2呈正相关关系。结论：恩度可以通过改变促血管生成因子与抗血管生成因子间的平衡,使肿瘤血管及其微环境在第4-10天实现短暂正常化,且在正常化时间窗内联合使用化疗药物抗瘤作用最明显：aCECs在血管正常化时间窗内表现为先上升后下降的过程,且在aCECs下降时凋亡CECs升高,aCECs早期升高可能提示新生血管床面积减小及血管正常化的开始、继而下降同时凋亡CECs升高反映肿瘤新生血管管能力下降及血管正常化时间窗的结束。动态监测CECs可帮助确定肿瘤血管正常化时间窗,为联合用药的最佳时间提供依据。