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背景:原发性肝癌目前十分常见,因为它有高度的侵袭性以及很高的复发率,肝癌已经是在世界范围内导致死亡的排在第二位的肿瘤。肝癌肿瘤细胞发生转移能很容易地导致患者死亡。因此,研究肝癌细胞发生转移的机制是目前很重要的任务。EMT,又名上皮间质转化。许多研究已经能够证实,EMT在肿瘤的发生发展过程中有着的重要的作用,特别是其能地促进恶性肿瘤细胞发生远处转移。。MicroRNAs(miRNAs)是一种长度约19~22个核苷酸分子的非编码小RNA片段,其在人体内的各种生命活动中发挥着重要的作用。目前认为,miRNAs在恶性肿瘤发生发展过程中发挥了重要的调控作用,它们能够发挥抑癌或者促癌的作用。到目前为止,已经发现许多miRNAs能够调控各种肿瘤的EMT,包括mi R-155。3-磷酸肌醇激酶(phosphoinositide 3-kinase,PI3K)是细胞中一个重要的原癌基因。PI3K信号通路已经证实在肿瘤的发生转移中起着重要的作用。SGK3与其他两个亚型,SGK1、SGK2同属于AGC蛋白激酶家族成员。SGK各亚型与AKT1的催化域有着55%的同源性,这表明SGKs可能在癌症的发展中与AKT有着相似的作用,SGKs已被报道参与细胞生长、增殖的调控,存活和迁移。目前还没有SGK3在肝癌的侵袭、转移以及肝癌干细胞方面的研究报道。因此,研究SGK3与EMT的关系,对进一步阐明肝癌细胞转移的机制有着重要的意义。第一部分sgk3对肝癌细胞emt的调控作用目的:研究上调/下调sgk3后对肝癌细胞emt的影响方法:1.利用过表达慢病毒/sgk3-sirna来上调/下调肝癌细胞株smmc-7721、huh-7中sgk3表达。westernblot用来检测转染后的效果。2.用westernblot检测e-cadherin、n-cadherin、vimentin的表达变化差异。3.用transwell小室侵袭/迁移实验来检验上调/下调sgk3后两组细胞的侵袭、迁移能力差异。4.利用划痕修复实验来检验上调sgk3后两组细胞的划痕修复能力的差异。结果:1、过表达sgk3后,肝癌细胞中的e-cadherin表达量下降、n-cadherin、vimentin表达量提高。抑制sgk3表达后e-cadherin表达量上升、n-cadherin、vimentin表达量下降。2、过表达sgk3后,肝癌细胞的侵袭、迁移能力迁移能力有了明显的提高。抑制sgk3表达后,肝癌细胞的侵袭、迁移能力迁移能力有了明显的下降。3、过表达sgk3后,肝癌细胞的划痕修复能力有了明显的提高。结论:sgk3对肝癌细胞的emt过程具有重要的调节作用。第二部分mir-155调节sgk3的表达目的:研究上调/下调mir-155后对sgk3以及akt1表达的影响。方法:1、利用mir-155mimic/mir-155inhibitor转染肝癌细胞株smmc-7721、huh-7中来上调/下调mir-155的表达2、用Western blot检测SGK3、p-AKT1、AKT的表达量变化。结果:1、上调miR-155表达后,SGK3、p-AKT1、AKT的表达量有了明显的提高,SGK3表达量提高的幅度比p-AKT1要更加显著。2、下调miR-155表达后,SGK3、p-AKT1、AKT的表达量有了明显的下降,SGK3表达量下降的幅度比p-AKT1要更加显著。结论:MiR-155能够调节SGK3、AKT1的表达,但对SGK3的作用更加显著。第三部分SGK3调节β-catenin表达目的:研究抑制SGK3表达后对β-catenin表达的影响。方法:1、利用SGK3-siRNA来下调肝癌细胞株SMMC-7721、Huh-7中SGK3表达,Western blot检测Activeβ-catenin,β-catenin。2、在转染了SGK3-siRNA肝癌细胞株SMMC-7721、Huh-7中加入蛋白酶体抑制剂MG132,Western blot检测Activeβ-catenin,β-catenin。结果:1、抑制SGK3表达后,Activeβ-catenin,β-catenin表达量有了明显的下降。2、加入蛋白酶体抑制剂MG132后,抑制SGK3表达对Activeβ-catenin,β-catenin表达量下调作用消失。结论:抑制SGK3能够通过蛋白酶体途径来下调β-catenin的表达。