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1994 年,Zhang 等学者利用定位克隆技术成功克隆了小鼠的肥胖基因(obese gene, ob )及人类的同源序列,ob 基因编码的蛋白质产物被称为leptin,译为瘦素。leptin 的发现使脂肪量和某些中枢部位可能存在着一定信号联系参与调节能量平衡和生殖这一存在了40 多年的假说得以证实。ob/ob 鼠和db/db(diabete gene, db)鼠分别由于leptin 基因突变和leptin 受体的基因突变而具有相似的表现:严重的早发肥胖,严重的胰岛素抵抗,饮食过多,能耗降低,不孕不育。但是,给予ob/ob 鼠腹腔注射leptin 后,不仅体重和摄食恢复至正常水平,生育能力也得以纠正;在雌性ob/ob 鼠卵巢和子宫的重量增加,血清黄体生成素(luteinizing hormone,LH)浓度增加,原始卵泡和囊状卵泡数量增多;在雄性ob/ob 鼠睾丸和精囊腺重量增加,生成精子数量增多。这些实验结果说明leptin 在调节摄食与能量消耗的同时也参与了对生殖功能的调控。尽管有大量的证据支持leptin 调节生殖功能的角色,然而leptin 究竟是直接还是间接调节下丘脑-垂体-性腺轴,仍旧需要更多的工作去阐明。因此,本实验研究leptin 对生殖轴中下丘脑的可能作用,期望通过观察leptin 对下丘脑神经肽Y 神经元(Neuropeptide Y, NPY)表达的影响,能够初步探讨leptin 调控生殖的可能作用机理,为leptin 的临床应用提供一定的实验依据。研究内容与结果如下: 一、obR 与NPY 在小鼠下丘脑的共表达目的:leptin 是连接营养与生殖的代谢信号,在生殖轴中发挥重要作用。由于未能发现obR 和obRmRNA 与GnRH 神经元在中枢的共性表达,大多数学者认为leptin 是间接作用于GnRH 神经元影响其分泌,而NPY 是目前研究最多的参与能量平衡和神经内分泌调控的重要调质,推测NPY可能介导了leptin 和GnRH 神经元之间的调节作用。所以实验中我们首先观察obR 与NPY 在小鼠下丘脑的分布,然后进一步观察两者在下丘脑的是否有共存情况,并以此作为下一步实验设计的依据。方法:选用成年雌性C57bl/6J 小鼠,经左心室用生理盐水和4%多聚